细胞外囊泡(EVs)因其不断发展的应用和突破而引起了人们越来越大的探索兴趣,特别是在疾病诊断和治疗潜力领域。这些由活生物体内的细胞产生的物质最初被认为是细胞废物。然而,研究揭示了它们在细胞通讯中的关键作用。例如EVs的组成,可以反映其来源细胞的生理或病理状态,使之成为一系列疾病的生物标志物,从癌症到神经退行性疾病和炎症性疾病。
准确表征EVs制剂的大小、异质性和浓度可分析、了解生物功能和为诊断提供重要信息。但从体液中提取的细胞外囊泡伴随着非EVs成分,形成了相当多样化的异质的系统,这对分析表征提出了重大挑战。
由于EVs的复杂性,通常采用多种技术方法来全面表征EVs,包括流式细胞术、蛋白质印迹、酶联免疫吸附测定(ELISA)、质谱蛋白质组学、基于显微镜的方法和纳米颗粒跟踪分析(NTA)。
NTA已成为快速表征细胞外囊泡高分辨率大小和浓度的常用技术。
NTA光学装置示意图
在本文涉及的研究报告中,使用来自尿液的EVs,通过光散射和荧光分析评估其大小分布和浓度。采用多种荧光染料和荧光基团,通过直接标记抗体进行生物标志物检测,使用NanoSight Pro对样品进行纳米颗粒跟踪分析,对每次荧光测量应用适当的激光波长和荧光长通滤光片,在NS Xplorer软件的专属荧光模式下,可在单次测量中对光散射和荧光进行组合分析,不仅报告尺寸分布,还直接报告浓度和荧光效率。
本白皮书阐述了如何使用NanoSight Pro探索各种标记方法,遵循染料特性(例如光稳定性和亮度)、样品制备方法(例如抗体亲和力和特异性、孵育条件)和测量条件(例如样品呈现、仪器设置、测量时间)等一些简单的规则,来实现荧光NTA检测EVs亚群,从而揭示细胞外囊泡EVs的不同特性。
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