方案摘要
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以分析其表达,测定表达对细胞生长的影响,或将高表达的基因产物纯化。将外源DNA导入哺乳动物细胞有两种途径:稳定(永久)或暂时性转染。稳定转染的目的是将转移基因整合到细胞染色体DNA上,形成稳定表达转移基因的细胞系。一般需要共转染一个选择标记,用于追踪转染成功的细胞或转染效率。暂时性转染的目的是为了分析转移基因的暂时转录或表达,一般在转染后1-4天内进行。针对培养细胞的外源DNA导入已发展出多种技术,其中常用的有磷酸钙介导的转染,DEAE-葡聚糖介导的转染,脂质体介导的转染,电穿孔法等。这4种方法除DEAE-葡聚糖法外,均可用于暂时性转染和永久性转染。但它们有各自适用的细胞系。培养的细胞不同,其在摄取和表达外源DNA的能力上可能存在几个数量级的差异。因此针对细胞系优化并比较几种不同方法的效率很重要。
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