离心机在多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法中的应用

2023/02/28   下载量： 0 次

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应用领域 生物产业
检测样本 生物农业
检测项目
参考标准 离心机在多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法中的应用

在液氮条件下，通过物理研磨方法破碎多酚类植物叶片的细胞，利用抗氧化剂防止多酚类化合物氧气褐变。适用于茶树、马铃薯、樱桃、葡萄以及其他富含多酚类的植物的植物基因组DNA提取及纯化。

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离心机在多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法中的应用

（根据中华人民共和国国家标准GB/T30988-2014）

一、原理

在液氮条件下，通过物理研磨方法破碎多酚类植物叶片的细胞，利用抗氧化剂防止多酚类化合物氧气褐变。适用于茶树、马铃薯、樱桃、葡萄以及其他富含多酚类的植物的植物基因组DNA提取及纯化。

二、 使用仪器

1. 冷冻研磨机（样品冷冻，研磨都处于液氮条件下）

2. 离心机（可以在4℃下进行离心，离心转速10000r/min以上）

3. 水浴锅（工作范围60℃～70℃）

4. 涡旋器

5. 平板电泳仪

6. 凝胶成像系统

7. 可调移液器

8. 紫外分光光度计

9.天平（精度为0.1mg）

                                image.png


 WIGGENS BIOCEN 22R 低温微量台式离心机                       WIGGENS WA8 通用水浴槽






                     

SOCOREX Stepper 416连续注射移液器                          WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪

三、 分析步骤

1. 取植物新鲜嫩叶，用无菌超纯水冲洗1皿，70%乙醇消毒2min，最后用无菌超纯水冲  洗2min，无菌吸水纸吸干水分，称取约0.5g（精确至0.1mg）。

2. 将干净的样本放于灭菌的样品研磨瓶中，使‍用WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪 将样品研磨成粉状，迅速用无菌玻璃棒将磨碎的样品用SOCOREX Stepper 416连续注射移液器转移至预冷的含有5mlDNA提取液的15ml离心管中，加入0.09gNa2S2O5,02gPVP,500ul巯基乙醇，颠倒混匀，放入WIGGENS BIOCEN 22R 低温微量台式离心机于4℃下5000r/min离心5min。

3. 去上清液，加入5ml预热65℃的DNA提取液，温和颠倒混匀，使‍用WIGGENS WA8 通用水浴槽于65℃温浴1h，期间每10min摇动一次。

4. 离心管放在冰上冷却，加入1ml预冷的NaAc溶液。

5. 混匀后加入5mL氯仿：异戊醇:乙醇溶液,温和颠倒混勾(需带手套,防止损伤皮肤),冰上静置5~10 min,使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。在4℃10000r/min离心10min，移取上清液至-无菌15mL离心管中,重复该步骤。

6. 将絮状DNA沉淀转入含有600ulTE的无菌离心管中。

7. 加入RNaseA溶液至浓度为10ug/ml，37℃温浴30min，加入0.1gPVP,加入等体积的氯仿：异戊醇:乙醇溶液，温和颠倒混匀，10000r/min离心10mi。

8. 取上清液于1.5ml的灭菌离心管内，充抽提一次，加入1/10体积的NaAc溶液，加入2倍体积预冷的无水乙醇，混匀，-20℃放置20min左右。

9. 在4℃10000r/min离心10min，弃上清液，加1ml70%乙醇，温和颠倒离心管数次，洗涤沉沦，重复2次。

10.向沉淀中加入500ul预冷的无水乙醇，在4℃10000r/min离心5～8s。

11.弃去乙醇溶液，将离心管开盖放置于室温下，待乙醇挥发干后将DNA重溶解于200ulTE缓解液。

四、注意事项

1.使用离心机时，注意规定的温度和转速。

2.制作试样时，要将水分完全吸干，重量精准到0.1mg。

3.使用仪器时注意规范使用




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文献贡献者

维根技术（北京）有限公司（WIGGENS）
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