恒温水浴槽在饲料中细菌总数的测定实验中的作用

2023/05/11   下载量： 0 次

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参考标准 恒温水浴槽在饲料中细菌总数的测定实验中的作用

试样经过处理，稀释至适当浓度，在一定条件下（如用特定的培养基，在温度30℃±1℃培养72h±3h等）下培养后，所得1g试样中所含细菌总数。

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恒温水浴槽在饲料中细菌总数的测定实验中的作用

（根据中华人民共和国国家标准GB/T 13093-2006）

一、原理

试样经过处理，稀释至适当浓度，在一定条件下（如用特定的培养基，在温度30℃±1℃培养72h±3h等）下培养后，所得1g试样中所含细菌总数。

二、使用试剂

1. 营养琼脂培养基

2. 磷酸盐缓冲液

3. 0.85%生理盐水

4. 水琼脂培养基

5. 实验室常见消毒药品

3、 使用仪器

1. 分析天平

2. 振荡器

3. 粉碎机

4. 高温灭菌器

5. 冰箱

6. 恒温水浴锅                              

7. 恒温培养箱

8. 微型混合器

9. 灭菌三角瓶 100ml 250ml 500ml

10. 灭菌移液管 1ml 10ml

11. 灭菌试管 16mmX160mm

12. 灭菌玻璃珠 直径5mm

13. 灭菌培养皿 直径90mm

14. 灭菌金属勺、刀等                                                                                           

四、分析步骤

1.试样制备 用 WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪将块状饲料、颗粒饲料、谷物饲料、原料、粉状饲料磨碎。

2.以无菌操作称取试样25g，放于含有225ml稀释液或生理盐水的灭菌三角瓶中（瓶中预置适当玻璃珠），置WIGGENS Vortex 3000 Elite涡旋振荡器上，振荡30min。充分振摇后，制成1:10的均匀稀释液，最好放置WIGGENS D-500 pro 高剪切数显分散机中8000~10000r/min的速度处理1min。

3.用1ml灭菌吸管吸取稀释液1ml，沿管壁慢慢注入含有9ml灭菌稀释液或生理盐水的试管中，振摇试管，或放微型混合器上，混匀30s，制成1:100的稀释液。

4.另取一只1ml灭菌吸管，按上述操作，作10倍递增稀释，每递增稀释一次，更换一次灭菌吸管。

5.根据饲料卫生标准要求或对试样污染程度的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个培养皿。

6.稀释液移入培养皿后，及时将凉至46℃±1℃WIGGENS WA20通用水浴槽内注入培养皿约15ml，小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀。

7.待琼脂凝固后，倒置平皿于30℃±1℃WIGGENS WH-01迷你低温培养箱内培养72h±3h取出，计算细菌总数，乘以稀释倍数，即得每克试样所含细菌总数。

8.使用WIGGENS Galaxy 230 菌落计数器观察出细菌数量，再求出同稀释度的两个平板菌落的平均值。

五、细菌总数的报告

                                                                           

六、注意事项

1. 分析步骤2中，使用灭菌吸管吸取稀释液时应注意吸管尖端不要触及管内稀释液。

2. 分析步骤5中，从稀释试样到倾注培养基之间，时间不能超过30min。

3. 平板细菌总数的选择中，每一稀释度使用两个平板菌落的平均数，两个平板其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用

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维根技术（北京）有限公司（WIGGENS）
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