【飞诺美色谱】猪肉中林可霉素残留量检测 LC-MS/MS法

艾杰尔飞诺美

2024/04/01 17:35

林可霉素(Lincomycin，又称洁霉素)主要用链霉菌发酵得到。常作用于细菌核糖体的50s亚单位，通过抑制肽链的延长而抑制细菌蛋白质的合成，从而清除细菌表面A蛋白质和绒毛状外衣，使其易被吞噬和杀灭。林可霉素对机体免疫系统有增强免疫调节，使得多核型白细胞的吞噬和杀菌功能增强，改变细菌表面活性，抑制细菌毒素的产生。可用于治疗革兰氏阳性菌和支原体感染，对葡萄球菌、链球菌作用较强，对厌氧菌有抑制作用，在许多感染症的治疗中疗效显著。用作饲料添加剂时，可促进肉鸡和育肥猪的生长。林可霉素造成的动物源性食品安全问题备受人们关注，因此，欧盟和我国对动物源性食品中林可霉素限量做了严格规定，其最大残留量为1µg/kg。

1.样品提取
称取5.0 g(精确到0.01 g)均质好的样品，置于50 mL离心管中，加入15 mL乙腈，用均质器均质1 min，在振荡器上振荡10 min，4200 rpm离心5 min，取上清液于另一50 mL离心管中；再加入10 mL乙腈于样品残渣，重复提取一次，合并上清液于50 mL离心管中，加入2.0 g氯化钠和10 mL正己烷，于振荡器剧烈振荡10 min，以4200 rpm离心10 min，小心吸取中间乙腈层10 mL于另一离心管中，55℃水浴氮气浓缩至近干。用7 mL磷酸盐缓冲液分两次溶解残留物，作为待净化液。

2.净化方法
先将Cleanert® PEP-2 (500mg / 6mL)小柱分别用10 mL甲醇，10 mL水，5 mL 0.2%氯化钠，5 mL磷酸盐缓冲液活化平衡；然后将待净化液过柱(流速控制在1 mL/min)；用10 mL水和5 mL甲醇-水(2:3，v/v)洗柱，弃去全部流出液，小柱用真空泵抽干15 min；最后用10 mL甲醇洗脱。收集洗脱液于45℃氮气吹干，用1 mL 10 mmol乙酸铵溶液(含0.15%甲酸)溶解残留物，过0.22 µm滤膜后待测。

3.检测方法

3.1色谱条件
色谱柱：Venusil® ASB C18，
2.1×100 mm，5 µm，150 Å；
流动相：A相-0.3%甲酸水溶液，B相-0.3%甲酸乙腈

柱温：35℃；
进样量：10 µL；梯度洗脱：见表1
表 1 液相色谱梯度洗脱条件

时间(min)	流速 (mL/min)	A/%	B/%
0.00	0.25	95.0	5.0
2.00	0.25	95.0	5.0
5.00	0.25	5.0	95.0
6.00	0.25	5.0	95.0
6.01	0.25	95.0	5.0
10.00	0.25	95.0	5.0

3.2质谱条件
离子源：电喷雾离子源

扫描方式：正离子扫描

电喷雾电压：5500 V 雾化气压力：45 psi
气帘气压力：15 psi

辅助气压力：50 psi

离子源温度：550℃
采集方式：多反应监测(MRM)
Q1、Q3均为单位分辨率质谱参数(见表2)

4.实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测林可霉素加标回收率在84%~105%之间，RSD值小于 10%，能够满足检测要求。由图1可看出经Cleanert® PEP-2固相萃取柱净化，采用Venusil® ASB C18色谱柱检测得到的林可霉素峰形良好，且保留时间稳定。

图 1 林可霉素样品加标 1.0μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图

结论：

本实验建立了林可霉素残留量的LC-MS/MS检测方法，并结合固相萃取技术对猪肉中林可霉素的含量进行了测定。对于加标量为1.0 µg/kg的样品进行了检测，回收率在84%~105%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中林可霉素的残留量。

5.订货信息

产品名称	规格包装	订货号
Venusil® ASB C18	5µm,150Å,2.1×100mm	VS951002-0
Cleanert® PEP-2	500mg/6mL,30/pk	PE5006-2
保护柱套	适用于4.6×10mm和2.1×10mm	SH-100
直联式保护柱芯	5µm,150Å,2.1×10mm	VS950102-0S
1.5 mL样品瓶	短螺纹透明带书写32×11.6mm,100/pk	1109-0519
1.5mL样品瓶盖	9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE隔垫,45．Shore A 1.0 mm,100/pk	0915-1819
微孔滤膜(Nylon)	13mm,0.22µm,200/pk	AS021320
一次性注射器	2mL两件式无针头,100/pk	LZSQ-2ML
乙腈UV级	4L/瓶,色谱纯	015-4
正己烷HPLC	4L/瓶,色谱纯	AH216-4
甲醇	4L/瓶,色谱纯	S230-4

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