摘要：本实验采用异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生剂，同时采用反向高效液相色谱法，以正亮氨酸为内
标物，使用Venusil○R AA氨基酸分析方法包，分析某植物提取物中氨基酸的组成。
关键词：高效液相色谱法；异硫氰酸苯酯(PITC)；植物提取物；Venusil○R AA 色谱柱
前言
氨基酸是生物体中重要的生命物质，是组成酶和蛋白质的基本单元。作为小分子，
氨基酸对生物大分子的活性及其生理功能起着极为重要的作用；作为配体，它可与多种
金属离子配位，为研究抗肿瘤、抗癌药物提供信息。各种氨基酸在生物体中具有不同的
生物功能，因此，准确灵敏地测定食物、药品和生物样品中氨基酸的含量具有十分重要
的意义。
本实验采用Venusil○R AA氨基酸分析方法包中的检测标准，使用Venusil○R AA氨基酸
分析专用柱对某植物提取物中的氨基酸组成进行了测试。
实验部分
仪器、试剂与材料
试剂材料
流动相 A：称取 15.2 g 无水醋酸钠，加水 1850 mL 溶解，用冰醋酸调节 pH 至 6.5，
然后加入乙腈 140 mL，混匀；
流动相 B：乙腈︰水=80︰20；
水解液：6.0 mol/L 盐酸溶液(含 1%苯酚)；
稀盐酸：0.1 mol/L 盐酸；
内标溶液：称取正亮氨酸 10 mg，置于 10 mL 容量瓶中，加稀盐酸溶解并定容至刻 度；
三乙胺乙腈溶液：取 Venusil○R AA 氨基酸分析方法包中三乙胺一瓶，加乙腈 8.6 mL，
混匀；
异硫氰酸苯酯乙腈溶液：取 Venusil○R AA 氨基酸分析方法包中异硫氰酸苯酯溶液 1
瓶，加乙腈 2.0 mL，混匀；
氨基酸标准溶液：取 Venusil○R AA 氨基酸分析方法包中 17 种氨基酸标准溶液（包
括门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、
酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、赖氨酸）1.0 mL，
稀盐酸 4.0mL 稀释，混匀；
某植物提取物样品：黄色粉末，由某药业有限公司提供。
样品水解
分别称取某植物提取物 A、B、C 各 1.0 g，分别置于 10.0 mL 水解管中，加 0.1 mol/L
稀盐酸 9.0 mL 溶解，振摇使样品均匀分散于溶液中。将水解管置 110 ± 1 ℃烘箱中水解
24 小时。取出水解管，冷却至室温，移取水解液 1.0 mL，置于 10 mL 样品瓶中，放入
氮吹仪中以 50℃氮吹至干，向残渣中加入 0.1 mol/L 盐酸 1.0 mL，超声使充分溶解，用
0.45 μm 滤膜过滤后，供衍生使用。
氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生
取 17 种氨基酸标准溶液、上述氨基酸水解液样品溶液各 200 μL，分别置于 1.5 mL
离心管中，向每个离心管中加入内标溶液 20 μL，混匀，然后依次向每个离心管中加入
三乙胺乙腈溶液 100 μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液 100 μL，混匀，室温放置 1 小时。再
向每个离心管中加入 400 μL 正己烷，振摇后放置 10 min，取下层溶液 200 μL，加 800 μL
水稀释，经 0.45 μm 针筒过滤器过滤，取续滤液作为样品试液。
色谱条件
色谱柱：Venusil○R AA；5 μm；4.6 × 250 mm；
流 速：1.0 mL/min；
柱 温：40 ℃；
波 长：254 nm；
进样量：10 μL；
梯 度：
表 1.液相色谱梯度洗脱条件
结果与讨论
本实验采用 Venusil○R AA 氨基酸分析方法包对某植物提取物中氨基酸进行了测试，
由表 2 及图 2、3、4 可知，使用 Venusil○R AA 氨基酸分析方法包共检测出某植物提取物
中 17 种氨基酸。
表 2. 某植物提取物中氨基酸含量测试结果
图 1. 18 种混合氨基酸对照溶液高效液相色谱图
图 2. 某植物提取物 A 水解液高效液相色谱图
图 2. 某植物提取物 B 水解液高效液相色谱图
图 2. 某植物提取物 C 水解液高效液相色谱图
结论
根据实验结果，使用 Venusil○R AA 氨基酸分析方法包共检测出某植物提取物中 17
种氨基酸，A、B、C 样品中氨基酸总量分别为 0.1600 mg/g、0.1599 mg/g、0.1289 mg/g。
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