【飞诺美色谱】
1. 实验材料
1.1 糖皮质激素类药物标准品
1.2 标准储备液及混合标准工作液的配置
分别精密称取适量的 11 种糖皮质激素标准品,用甲醇溶
解定容,分别配制成 1000 µg/mL 的贮备液。-20℃ 以下保存。
混合标准工作液:准确量取糖皮质激素类药物标准贮
备液适量,用20%乙腈水溶液稀释成适宜浓度的混合标准
工作液,现配现用。
1.3 标准储备液及混合标准工作液的配置
a) 10% 亚铁氰化钾溶液:称量 2.3 g
K4Fe(CN)6•3H2O,用水溶解定容至 20 mL;
b) 20% 乙酸锌溶液:称量 4.78 g C4H6O4Zn•2H2O,
用水溶解定容至 20 mL;
c) 定容液:量取 70 mL水 和 30 mL 乙腈,混匀后加入
100 µL 甲酸混匀。
2. 样品提取
霜膏类化妆品:称取 0.2 g 试样 (精确至 0.01 g)于 50
mL 离心管,混匀。加入 3 mL 饱和氯化钠溶液,涡旋混合
使样品分散,加入 3 mL 乙腈,超声提取 5 min,8000 r/min
离心 5 min,吸取上层清液于另一 50 mL 离心管中,下层
氯化钠溶液用 2 mL 乙腈重复提取一次,合并二次乙腈提
取液,往提取液加入 40 mL 去离子水,混匀,加入亚铁氰
化钾溶液 0.2 mL,混匀,加入乙酸锌溶液 0.2 mL,混匀,
8000 r/min 离心 10 min,作为待净化液。
精油类样品:称取 0.5 g 试样 (精确至 0.01 g)于 50 mL离
心管,混匀。加入 4 mL 正己烷,涡旋混合使样品分散,加
入4 mL 50%乙腈水溶液,涡旋提取2 min,8000 r/min离心5
min,吸取下层提取液,上层正己烷用4 mL 50%乙腈水溶液
重复上述提取步骤一次,合并二次50%乙腈提取液,往提取
液加入36 mL去离子水,混合,加入亚铁氰化钾溶液0.1 mL,
混匀,加入乙酸锌溶液 0.1 mL,混匀,8000 r/min 离心 10
min,作为待净化液。
3. 固相萃取柱净化
将 Cleanert® PEP-2 固相萃取小柱置于 Qdaura® 卓睿全自
动固相萃取仪,上样液转移至上样管中,溶剂置于相应的溶
剂瓶中,设定操作程序如下:用 5 mL 甲醇、10 mL 水活化。
将上样管中溶液全部上样,然后以 10 mL 10% 乙腈水溶液淋
洗小柱,通气吹干小柱中的残留液 (5 min)。最后以 6 mL 甲
醇洗脱小柱,通气吹干小柱中的残留液 (5 min),以上操作流
速均设定为 1 mL/min。取出收集瓶,于 40℃氮气吹干,用 1
mL 定容液溶解定容,过 0.22 µm Nylon 滤器,待测。
4. 检测条件
4.1 液相色谱条件
色谱柱:Venusil® ASB C18,3 µm,150 Å,2.1 × 150 mm;
柱温:30℃;
进样量:10 µL。
流动相:A 相:含 0.1% 甲酸的水溶液;
B 相:含 0.1% 甲酸的乙腈溶液;
梯度洗脱程序见表4
4.2 液相色谱条件
离子源:电喷雾离子源; 扫描方式:负离子扫描;
检测方式:多反应监测; IS:-4500V;
GS1:55Psi; GS2:55Psi;
TEM:550℃;
表 3 糖皮质激素类药物多反应监测的优化参数
图 1 11 种糖皮质激素液相色谱 - 串联质谱图
5. 结果与讨论
以市售玫瑰精油和护手霜为基质,进行添加回收实
验,进行0.1 µg/g 和 0.05 µg/g 添加浓度的实验,11 种糖皮
质激素的回收率和重现性如下:
实验结论:使用 Cleanert® PEP-2、Venusil® ASB C18,
API 4000 PLUS 三重四级杆质谱仪进行定量分析,建立了
一种化妆品中 11 种糖皮质激素同时检测的分析方法,在
高低添加水平下,11 种糖皮质激素的平均回收率为 75%-
120%;相对标准偏差均小于 13%。实验结果表明本方法快
速、准确,可用于化妆品中糖皮质激素的检测。
表 4 玫瑰精油 0.1 µg/g 添加回收实验结果
表 5 玫瑰精油 0.05 µg/g 添加回收实验结果
实验结论:使用 Cleanert® PEP-2、Venusil® ASB C18,
API 4000 PLUS 三重四级杆质谱仪进行定量分析,建立了
一种化妆品中 11 种糖皮质激素同时检测的分析方法,在
高低添加水平下,11 种糖皮质激素的平均回收率为 75%-
120%;相对标准偏差均小于 13%。实验结果表明本方法快
速、准确,可用于化妆品中糖皮质激素的检测。
6. 订货信息
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IVT转录过程中NTPs和帽子类似物残留的检测
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