【飞诺美色谱】血浆中多肽药物的测定

艾杰尔飞诺美

2024/06/17 14:04

血浆中多肽药物的测定

应用及技术服务部

概述

多肽是由多个氨基酸通过肽键连接而形成的一类化合物，通常由10~100个氨基酸分子组成，其连接方式与蛋白质相同，相对分子质量低于10000。多肽普遍存在于生物体内，迄今在生物体内发现的多肽已达数万种，其广泛参与和调节机体内各系统、器官、组织和细胞的功能活动，在生命活动中发挥重要作用。

关键词

多肽；Peptide-1-MW；Luna Omega Palor C18；

LC-MS/MS

化合物信息

实验部分

3.1仪器、试剂与材料

3.1.1主要仪器设备

液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX Triple QuadTM5500)，配有电喷雾离子源(ESI)；

孔正压装置(Agela Cleanert M96)；

氮吹浓缩仪(Agela Cleanert V96)。

3.1.2试剂材料

96孔板：Peptide-1-MW

屈臣氏蒸馏水，甲醇、甲酸、乙酸铵、乙腈、氨水均为色谱级。

3.1.3样品基质

EDTA抗凝大牛血浆

3.2样品前处理方法

预处理：200 μL血浆加入200 μL 2%氨水水溶液，涡旋，待净化；

活化：96孔板依次使用 200 μL甲醇、200 μL水活化；

上样：加载预处理后的血浆至活化后微孔板；

淋洗：依次使用500 μL水、200 μL水淋洗微孔板；

洗脱：用100 μL洗脱液（2%甲酸乙醇：水=3:1）洗脱2次，涡旋混合；

氮干复溶：37 ℃氮气干燥20 min后，加入150 μL水涡旋混合，待检测。

3.3仪器检测条件

3.3.1色谱条件

色谱柱： Luna Omega Polar C18（2.1×50 mm, 1.6 μm, 100 Å）；P/N: 00B-4748-AN

流动相A相：0.1%甲酸5 mM乙酸铵水溶液；

流动相B相：0.1%甲酸乙腈溶液；

流速：0.3 mL/min；

柱温：40 ℃；

进样量：10 μL；

梯度程序见表2：

3.3.2质谱条件

离子源类型：电喷雾离子源（ESI+）

扫描方式：多反应监测正负离子模式（MRM）

喷雾针电压：5500 V

离子源温度：500 ℃

加热器（GS1）：60 psi

辅助加热气（GS2）：60 psi

气帘气（CUR）：40 psi

碰撞气（CAD）：10 psi

为获得较好的稳定和灵敏度，各化合物监测离

子对的去簇电压（DP）和碰撞电压（CE），目

标化合物定量离子对以及内标监测离子对等参

数均需经过系统优化。本案例参数仅供参考不

具备法律效力。

3.4结果与讨论

由表4可知，大部分肽类在该模式下的外标法回

收率均在80%~120%之内，相对标准偏差RSD小于10%

可以满足分析需求。

结论

本实验建立了血浆中小肽类药物的检测方法，特立帕肽的通常回收率在40%-60%之间，考虑到方法的普适性故选择此进行前处理。

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