徕卡工程师带你了解显微镜镜油

徕卡显微系统(上海)贸易有限公司

2024/09/20 16:19

要用显微镜在高倍镜下检查样品，有许多因素需要考虑，其中包括分辨率、数值孔径（NA）、物镜的工作距离，以及物镜前透镜采集图像所用介质的折射率。我们通过这篇文章简要地看一下如何在盖玻片和物镜前透镜之间利用镜油帮助提高NA和分辨率，提高成像质量。

什么是镜油？

在物镜前透镜和标本盖玻片之间的空隙中填充浸没液体可提高物镜的分辨率。通过使用折射率接近的油，可以减少光的散射和折射，提高成像的清晰度和分辨率。空气的折射率为1.0，而显微镜载玻片和盖玻片的折射率通常为1.5。考虑到这一差异，浸泡液体的目的是匹配（尽可能接近）玻片的折射率，从而增加形成最终图像的光线量。大多数浸油的折射率为1.51。常见折射率见表1。

浸没介质	RI
空气	1.00
水	1.33
甘油（100%）	1.47
香柏油	1.51
徕卡浸没油（ “F”型）	1.51

为什么要用镜油？

通常镜油提高成像质量主要通过以下几个方面：

增加分辨率

当光从样品通过盖玻片进入物镜时，如果中间存在空气，它会发生折射和散射，从而降低成像质量。镜油的折射率与玻璃盖玻片和物镜的折射率相似，使用镜油可以减少光的折射和散射，提高图像的分辨率。

提高光的收集能力

镜油可以增加物镜的数值孔径（NA），即物镜收集光的能力。数值孔径越高，显微镜的分辨率和成像质量就越好。

减少光损失

镜油可以减少由于反射和散射引起的光损失，使更多的光线进入物镜，从而提高图像的亮度和对比度。

减少光学伪影

在高倍显微镜观察时，使用镜油可以减少由光折射和反射引起的光学伪影，使得图像更加清晰。

哪些物镜需要使用镜油

以下图为例，物镜上标识的“100X/1.25 OIL”，指100倍放大倍数，NA=1.25，“OIL”指需要使用镜油。

选择镜油的参考因素

在选择镜油时，需要考虑以下几个因素：

折射率：选择折射率与盖玻片和物镜相匹配的镜油，以减少光的折射和散射。

粘度：镜油的粘度应适中，以确保在使用过程中能够均匀涂抹，不易形成气泡。

化学相容性：选择与显微镜和样品材料相容的镜油，避免化学反应导致的损坏。

自发荧光：对于荧光显微镜应用，应选择低自发荧光的镜油，以避免影响成像质量。

徕卡官方建议使用的原厂镜油

可供选择的镜油有多种，下面两种常用的点击链接可以直达商城采购：

Type F Immersion Liquid

徕卡官方货号：11513859

10ml

23℃折射率 1.5180

严格根据ISO 8036制造，保证成像质量，厂家推荐的镜油

超低自发荧光，提升信噪比，适用荧光应用

适用于APO油镜，以完成最佳成像

链接

镜油TYPE F IMMERSION LIQUID, ISO 8036徕卡原产耗材和配件

Type N Type N Immersion Liquid

徕卡官方货号：11513860 (20ml) 和11513861 (250ml)

严格根据ISO 8036制造

低端应用可以使用

两种容量规格

链接

TYPE N IMMERSION LIQUID, ISO 8036, 250ML镜油

TYPE N IMMERSION LIQUID, ISO 8036, 20 ML镜油

如何使用镜油？

以配置5X 10X 20X 40X干镜和100X油镜为例，从使用低倍物镜5X-10X查看样本开始，在样品上找到感兴趣的区域。

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逐步切换至40X物镜并均调至焦面。

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通过物镜转盘（物镜的连接底座）在40x和100x物镜之间切换但不要直接接触高倍物镜。

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从显微镜的一侧看去，小心地将1滴镜油直接滴到盖玻片上。将高倍物镜摆入到位（继续从一侧观察载物台），先粗调然后微调对焦，让物镜前透镜与镜油发生接触。有些油浸物镜的前透镜是凹面的，这意味着还应该在物镜上滴一滴油以防止气泡被困在凹透镜中。

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然后可以再次通过目镜观察。仅使用微调对焦来调整视野。虽然高倍物镜含有弹簧加载式转换器，但在这个阶段粗聚焦很容易导致盖玻片或载玻片破裂，也可能损坏物镜前透镜。

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即便您计划观察其他载玻片，也应在此阶段清除物镜上的镜油以防止可能污染显微镜的其他部分。对于不适合浸没的显微镜部件和物镜，镜油会渗透并造成损坏。用擦镜纸在镜片上擦一次，去除多余的油。每次擦拭都要用干净的擦镜纸擦拭物镜前透镜，直到没有残留油的痕迹。可使用除油溶液或少量二甲苯最终清洁透镜。同样，在对透镜应用任何溶液之前，请务必仔细了解物镜制造商的建议。