药典9628公示稿 无菌药品包装系统密封性检查方法之——微生物挑战法：细菌侵入测试仪

包装系统密封性，是指药品包装系统防止内容物损失、微生物侵入以及其他气体进入的能力。无菌产品的包装系统是保障产品安全性和质量的关键。用于检查包装系统密封性的方法包括微生物挑战法（浸入或气溶胶法）、高压放电法、激光顶空分析法等。常用的密封性检测方法见表1。

 表1常用的密封完整性检查方法

法规背景

2025版中国药典《9628无菌药品包装系统密封性指导原则标准草案公示稿（第二次）》以及2020年药审中心发布的《化学药品注射剂包装系统密封性研究技术指南（试行）》和《化学药品注射剂仿制药质量和疗效一致性评价技术要求》中指出，对于无菌制剂，需要选择适当且经过验证的密封性检查方法对样品进行检测。密封性检查方法优选能够确定产品最大允许泄露限度的确定性方法。如果方法的灵敏度无法达到产品最大允许泄露限度水平，建议至少采用两种方法进行密封性验证，其中一种推荐使用微生物挑战法。

USP <1207.2> Package Integrity Leak Test Technologies（密封性泄露检测技术）中也提到，“当没有经过验证的理化泄露测试方法或当测试结果要求有防止微生物进入的直接证据时，浸没微生物挑战法是最有效的。”

对于无菌制剂而言，在产品开发阶段，需结合药品自身特点及生产设备综合考虑，选择合适的密封性检测方法，并对两种方法进行验证，进而在日常商业化生产中，选择灵敏度最高的方法对产品进行抽样检测。然而，对于熔封产品（如玻璃或塑料安瓿），应进行100%的密封性检测。一般出于便利性和商业化成本的考虑，可以选择微生物挑战法对产品的密封性进行研究。

微生物挑战法介绍

微生物挑战法是通过将装有促生长培养基的包装浸没于菌悬液中暴露（液体负荷挑战测试）来评价包装完整性。通过挑战微生物后在包装内容物中的生长来证明泄漏，是一种概率性检查方法。2023年版《药品GMP指南 无菌制剂》中列举了微生物侵入法验证包装密封性的实例，操作步骤如图1所示。

图1微生物侵入试验法验证密封性实例—《药品GMP指南（第2版）无菌制剂》

自2024年2月1日起实施的团标TZJPA 002-2023《注射剂包装密封性检查 微生物挑战：浸入式暴露试验要求》首次提出了对注射剂包装密封性检查相关的微生物挑战技术要求。该团标对微生物挑战法进行了细致的解读，从试验程序、挑战容器、微生物选择、培养基选择和样品准备、取样、挑战悬液制备以及暴露试验条件等几个参数进行规定，并对微生物挑战法方法灵敏度试验进行资料性展示。

微生物挑战法存在的难点

微生物挑战法的试验条件宜采用实际运输、使用及工艺中可能遇到的最不利条件，需考虑微生物种类与浓度、真空/压力条件、测试时间、结果确认、样品除菌方法等多个参数。

需使用浓度较高的菌液，存在生物安全隐患

常用的挑战微生物包括黏质沙雷氏菌、缺陷短波单胞菌、萎缩芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌等。GMP指南和USP 1207要求最低浓度为105（cfu/ml）。然而，传统微生物挑战法是直接将菌悬液倾倒入测试罐中，倾倒过程中菌悬液飞溅会对人员安全产生威胁。

另外，GMP指南和团标TZJPA 002-2023指出，当挑战试验结束后，需擦干试样容器外残余的菌悬液（或用无菌水清洗样品外壁），并将样品放入保护容器或无菌袋中进行培养。在擦拭、清洗、转移过程中，菌悬液可能会逸出污染实验环境或对人员安全造成威胁。

需模拟实际环境中可能出现的压力变化

由于产品在运输过程中可能出现压力变化，例如在飞机高空运输时，低压环境导致包装系统内气压高于环境气压，若出现泄露，微生物可能会侵入。另外，产品在灭菌过程中也可能出现压力变化。因此，微生物挑战法试验过程中需模拟实际压差条件，以达到最不利条件。

 具体绝对压力条件与不同运输海拔之间的关系 （ASTM D6653/D6653M 压力换算表）

挑战试验过程中数据的可靠性

GMP指南中明确阐述了数据可靠性的整体策略，其中指出：通过数据和记录追溯到产生数据、修改数据的个人或系统，确保数据和记录中的签名与实际操作人员一致；数据及记录在整个生命周期内清晰可读取、可追溯、可保存，在数据及记录中清晰地呈现步骤或事件发生的顺序。因此，在微生物挑战试验过程中，需保证数据和记录的可靠性，以满足GMP要求。

解决方案-泰林细菌侵入测试仪
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泰林生物研发的细菌侵入测试仪完美解决了微生物挑战法中的难点。采用细菌侵入测试仪进行微生物挑战试验，抽真空、加正压、菌液加注以及排放、清洗、转运培养、结果观察以及灭菌均在全封闭条件下完成，可保护试验人员并防止对实验环境造成污染；可精准调压，且压力调节范围完全满足实际环境可能出现的压力变化；试验过程电子数据全程保留，可追溯，不可修改，支持三级权限、电子签名，符合GMP要求。

此外，细菌侵入测试仪适用于安瓿瓶、西林瓶、输液袋等多种类型的包装，可设置多种配方程序，满足不同产品测试需要。

产品用途

总结

无菌药品包装容器的密封性能，对于保持药品的无菌要求至关重要。微生物挑战法可用于验证包装容器的密封性。细菌侵入测试仪是基于微生物挑战法和色水法，专门用于无菌药品包装完整性的仪器，通过设置不同压力变化的场景条件，验证特定不同包装容器及密封工艺对微生物的阻隔性能。