PITC 衍生法分析 18 种氨基酸
方法:适用于 ChP. 2015 二部中《复方氨基酸注射液中氨基酸的测定》氨基酸分析步骤
1. 原理
这种分析氨基酸的方法基于柱前衍生步骤,衍生化反应是在碱性条件下完成的,采用异硫氰酸苯酯和游离氨基酸反应生成的 PTC-氨基酸衍生物可于 UV 254nm 处被检测到。通过 PITC 衍生法改善的氨基酸分离,同样使其分析更有效。
2. 试剂
三乙胺溶液:将 1.4mL 1mol/L 三乙胺溶液和 8.6mL 乙腈混合均匀;
异硫氰酸苯酯溶液:配成 12.5μL/mL 的异硫氰酸苯酯的乙腈溶液(即 0.1mol/L);
18 种氨基酸标准溶液:溶解或稀释一定量的 18 种氨基酸于 0.1mol/L 盐酸中,配制成 0.5μmol/mL 的 18
种氨基酸标准溶液。
3. 衍生化
转移 200μL 的 18 种氨基酸标准溶液(或样品溶液)入 1.5mL 塑料管中,加入 100μL 三乙胺溶液和 100μL 异硫氰酸苯酯溶液,混合,至于室温下反应 1h 后,加入 400μL 正己烷,涡旋振荡 10min。取澄清的下层液,稀释三倍后,用 0.45μm 滤膜过滤后进样。
4. 液相色谱分析
色谱柱:ACE Excel SuperC18 5μm 250×4.6mm(货号:EXL-1211-2546U)
流动相:A:0.1mol/L 醋酸钠溶液(用稀醋酸调节 pH 值至 6.5)-乙腈(93:7) B:乙腈-水(80:20)
流速:1ml/min
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