我们知道以往的固定组织或固定细胞成像揭示了非常多的自然秘密,给了我们很大的启示,但现在的科学研究则希望在最真实的条件下观察细胞。纵观显微镜的发展历史,直到15年前,科学家主要还是处理死细胞。现在,活细胞研究的重要性已经越来越被意识到。
东胜创新(DeltaVision Elite活细胞成像系统)
加拿大McGill大学成像实验室主任Claire M. Brown表示:“要达到这个研究目的,我们非常需要一个不损坏细胞的封闭环境、且具有比较理想的成像条件。这一条件尤其对于进行动态、三维成像的多标记样品来说尤其重要。”让人高兴的是,近年来在光学设计、高灵敏检测器、优选探针和先进软件方面的改善,使得这一切成为可能。今天的活细胞工作站,不仅仅限于观察,目前的趋势已经从结构或细胞器的分析,转向了功能的相互影响观察研究。
现在,科学家可以便利的购买到活组织应用的整合新设备,而不用将系统简单的拼凑在一起。如GE公司的活细胞工作站DeltaVision Elite提供适用于活细胞成像的高分辨率、高灵敏度、全自动化设备。通过对活细胞进行实时、长时间的成像,观察细胞内的动态变化过程,如细胞的有丝分裂、钙火花传导、细胞运动和迁移等。同时,搭载全内发射荧光模块(TIRF)对分子和膜运输之间的囊泡转运、相互作用成像尤其有用;搭载单分子成像技术,如PALM,STORM等,可实现超高分辨率成像,分辨率可达20nm。在照明波动中,DeltaVision Elite通过TruLight均一照明光学系统,控制光照的强度和均一性。计算机对这些变量的完全控制,确保了精确的、可重复的成像效果。
DeltaVision Elite通过专利的InsightSSI光源,大幅度的降低光毒性和光损伤,实现对活细胞长达500小时的连续成像;同时,专利的还原型迭代去卷积技术保证高分辨率、高灵敏度的图像获取。这一系列的专利设计在保证高质量图像的同时,实现了对活细胞的长时间连续成像,“鱼”与“熊掌”兼而得之。
正在分裂的Hela细胞,其中绿色标记微管蛋白,红色标记染色体。
另外,专利的UltimateFocus自动对焦系统通过远红外激光实时监测盖玻片和物镜镜头之间的距离,保持成像焦平面的稳定,防止长时间time-lapse成像过程中跑焦现象的发生。活细胞培养环境控制系统能够实时控制细胞培养的温度、湿度和CO2浓度,以及整个成像系统的温度稳定性,保证成像的精确和可重复性。功能强大的SoftWoRx图像处理软件能够实现XYZ-λ(波长)-T(时间)-P(位置)六维活细胞成像、Time-Lapse成像、去卷积、三维重建、视频电影制作、多点观察、细胞跟踪、共定位分析、FRET/FRAP/TIRF成像、荧光强度定量分析等。
目前,活细胞成像方面的进展仍然在不断涌现。快速的、不断改善的动态分析方法,将对活细胞内部的功能蛋白质进行更好的研究。成像专家也在进一步推动原位成像的真实性。人们不仅想去观察一个动物体中的一个细胞,并且用显微镜进行成像,而且也期望看到全貌。你将会看到越来越多的整体动物的成像。对活细胞成像来说,能同时进行多通道成像,并且区别多重荧光信号将变得越来越重要。
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