方案摘要
方案下载| 应用领域 | 医疗/卫生 |
| 检测样本 | 医疗/卫生 |
| 检测项目 | |
| 参考标准 | 粪便DNA提取 |
短短几十秒内就可彻底裂解粪便中的微生物； 得到的DNA可直接用于消化道菌群的定量和定性实验； 实验结果的可重复性及一致性； 彻底去除腐殖酸和PCR抑制剂。
JaninaFerrand等人发表在Journal of Microbiological Methods杂志上的一篇文章中，对比了7种提取粪便DNA的方法。
实验材料和方法
1. 样品采集
样本从五只8周的C57BL/6品系的小鼠中获得，有两种样本类型，分别为粪便样本和盲肠内容物。将粪便样本取出后立即放于-20℃条件下冻存。盲肠内容物样本经解剖得到后尽快放于-80℃冻存。
2. DNA提取。所用不同方法或试剂盒种类如下：
3.DNA纯度和质量检测。
OD A260/A280比值测定以及0.8%TBE凝胶电泳实验。
实验结果
图一 利用七种方法得到的DNA比较
上图一可以看出，在针对粪便样本进行DNA提取中，利用FpS试剂盒得到的DNA得率为58.2μg/g，利用FpF试剂盒得到的DNA得率为63.69μg/g，与其他试剂盒相比DNA得率明显较高。
另外，在针对盲肠内容物样本进行DNA提取过程中，利用FpS试剂盒得到的DNA得率为74.55μg/g，利用FpF试剂盒得到的DNA得率为36.64μg/g，与其他试剂盒以及提取方法（BO）相比，DNA得率遥遥领先，分别位于第一和第二位。
图二 利用七种方法得到的DNA电泳图结果比较
从以上图二的电泳图可以看出，在粪便样本中，Fps泳道DNA无拖尾现象，表明DNA纯度较高，没有降解，且DNA片段大于5kb，证明提取得到的DNA完整性很高；
在盲肠内容物样本中，Fps和FpF泳道无拖尾现象，无降解，且DNA片段大于5kb，证明得到的DNA纯度高，完整性高，可直接用于下游实验。
实验结论
经过以上7种实验方法的对比可以看出，不同的提取方法中样本的处方式不同，FpS，FpF方法使用了研磨珠与Fastprep-24 （MP Biomedicals）一起使用的方法；BO使用超声波来破碎样本；这些都属于使用仪器设备对样本进行物理破碎。显然通过物理破碎的方法比化学裂解的方法DNA得率高（如MG、QS、EM）。
且只有FpS，FpF这两种方法得到的DNA质量和纯度较好
文献贡献者
便携式研磨仪
植物蛋白研究案例分析
如何正确选择裂解介质
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