方案摘要
方案下载| 应用领域 | 生物相关产业 |
| 检测样本 | |
| 检测项目 | |
| 参考标准 | 植物蛋白提取 |
过敏原是一类具有广泛分子量（5-50 kDa）的蛋白，表现出不同特点的水溶性和稳定性，与免疫系统接触后，能够引起IgE介导的超敏反应。所以从花粉颗粒中快速提取蛋白质尤为关键。
植物蛋白研究案例分析
引言
过敏是一种免疫系统的超敏反应性疾病。根据流行病学研究，目前世界上很多国家20-30%的人口患有过敏症，而且这一比例有不断增长的趋势.
花粉是临床相关户外过敏原的重要来源，是公认的主要触发，并引起呼吸道过敏性疾病的原因.
过敏原是一类具有广泛分子量（5-50 kDa）的蛋白，表现出不同特点的水溶性和稳定性，与免疫系统接触后，能够引起IgE介导的超敏反应。新型过敏治疗的研发需要鉴定出多样化和典型的过敏原。这项研究描述了鉴定过敏原的一种有效方法.
概述
关键词: 过敏原，IgE免疫反应，花粉匀浆，超敏反应群体，DNA提取
研究目的: 研究从花粉颗粒中快速提取蛋白质的方法
应用: Western blot 分析
样本名称: 桦木、荨麻、墙草花粉
样本类型: 花粉
材料: FastPrep-24™ 5G仪器, 2ml低温适配器, 2ml的裂解介质管C和E
缓冲液: PBS
实验步骤
A-震荡孵育方法
1.在2ml裂解介质管C或E中加入500ulPBS和50mg花粉
2.将管子置于冷室的摇床上震荡18小时
3.4°C，18000g离心悬浮液20分钟
4.在分析之前将上清液储存在-20°C
B - FastPrep®研磨方法
1.在2ml裂解介质管C或E中加入500ulPBS和50mg花粉.
2.将裂解介质管放入含有干冰的低温适配器中.
3.运行FastPrep-24TM 5G：以6.0m/s的速度运行40秒.
4.4°C，18000g离心裂解介质管20分钟，沉淀残渣.
5.在分析之前将上清液储存在-20°C
实验结果
图一：光学显微镜观察松木花粉（200X），FastPrep-24™ 5G仪器研磨之前和之后。
左：研磨前的花粉颗粒。右：用FastPrep-24™ 5G仪器配合裂解介质C和E研磨后的花粉颗粒.
实验结果表明用FastPrep-24™5G和裂解介质C能够完全破碎花粉颗粒的结构。
图二：震荡孵育方法与FastPrep®方法提取8个松木花粉样本蛋白质的结果比较。用4批不同的松木花粉重复四次。用考马斯亮蓝染色的方法检测蛋白质浓度。
实验结果表明与震荡孵育方法相比用FastPrep-24™5G仪器可提取得到的蛋白质浓度较高，且浓度高达2mg/ml。
图三：震荡孵育方法（OVN）和使用裂解介质C或E的FastPrep®方法提取的蛋白质的结果比较。考马斯亮蓝胶染色。
实验结果表明对所有测试的花粉，用FastPrep-24™ 5G仪器能有效的提取蛋白质。
图四：用FastPrep-24™ 5G仪器得到的花粉提取物IgE免疫活性检测。左：6个桦树花粉过敏的患者对桦树花粉蛋白（9-14）测试IgE免疫活性。中间和右：12个草本花粉过敏的病人对荨麻和墙草花粉蛋白测试IgE免疫活性（17-22和25-30）。相对分子量用KDa来表示。15, 16, 23, 24, 31 和 32 为阴性对照。
实验结果表明用FastPrep-24™ 5G仪器得到的花粉提取物具有IgE免疫活性检测。
图五：荨麻和墙草花粉用Fastprep®的方法及震荡孵育的方法提取的蛋白质电泳图谱的比较。4种提取物均未经稀释或浓缩。8-18%SDS-PAGE胶。考马斯亮蓝胶染色。
实验结果表明用FastPrep®方法提取的蛋白质含有多种成份。
结论
1. 与需要过夜震荡孵育的方法相比，fastprep-24TM 5G仪器能更有效的从花粉样本中提取蛋白质。
2. FastPrep®方法的有效性表现在可以定量，高蛋白质产量，和可以定性，提取的蛋白含有多种组分。
3. FastPrep®是一个强大的工具，它能够快速和高度重复的提取蛋白质，并可直接用于下游SDS-PAGE胶电泳分析。
4.使用FastPrep-24 5G仪器提取的蛋白质在IgE免疫反应中是可信的。
文献贡献者
便携式研磨仪
7种粪便DNA提取的方法比较
如何正确选择裂解介质
相关产品
关注
拨打电话
留言咨询
