第四军医大学某实验室近期解决了一件烦心事。他们在做药物代谢原理分析实验时,需要对采集到的大量的受试兔子心脏肌肉组织和肺部组织样品进行破碎处理,用于后续做不同方法的对比分析。然而,使用实验室现有的组织匀浆器,不仅一次处理通量少、易污染且难清洗,处理后的样品还不够均匀细致,基本达不到做后续分析实验的要求。为此,实验项目一度无法大规模开展。2014年11月,实验室人员联系鼎昊源科技,申请试用TL2010S组织破碎器(又称TL2010S中通量组织研磨破碎器)进行样品破碎处理,在鼎昊源科技工程师现场协助下,终于摸索出批量快速高效破碎心肺组织样品的好方法,主要有以下操作要点:
1.将采集后的心肺组织粗样分别置入5ml破碎器研磨管(或普通圆底离心管),每管置入量约占单管1/3体积为最佳;
2.在每个离心管中置入3颗直径8mm的不锈钢研磨珠,盖好管盖,将离心管对称装入适配器中,上摇臂固定;
3.将TL2010S组织破碎器参数设置为转速1800rpm、每研磨60秒自动停止研磨10S且循环5次(即间歇研磨5分钟);
研磨程序完全停止后,取出并打开离心管,破碎后的样品状态如下图2现场照片所示,可见样品破碎得非常均匀细致:
图1:TL2010S组织破碎器实机照片 | 图2:破碎心肺组织的效果现场实拍(使用的是普通5ml离心管)
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为什么实验室人员之前使用常规组织匀浆器无法实现较好的破碎处理呢?
鼎昊源科技通过大量样品破碎测试发现,动物组织类样品本身相比其他样品更难破碎,特别是一些结缔组织、心脏组织、肺部组织,因为韧性较大,一般很难用普通手工研磨或者常规组织匀浆器彻底破碎,所以也就无法满足后续精细的实验要求。而使用TL2010S组织破碎器,可针对不同体积和数量的样品,搭配不同规格的离心管及适配器,进行多样品的同时高速破碎。不仅操作灵活方便,还同时避免了样品间的交叉污染,省去了清洗仪器的繁琐工作。
为什么要选用5ml破碎器研磨管(或普通圆底离心管)呢?
我们知道TL2010S组织破碎器还可搭配多个1.5/2.0ml离心管进行研磨,但在本实验中,这种规格的离心管相对于要大量破碎的粗样来说容量偏小,而且可容纳的研磨珠也较小,所以撞击力度有限,达不到最佳的研磨效果。而使用5ml破碎器研磨管(或普通圆底离心管),单管置入的样品量不仅增加了,还可置入更大尺寸的研磨珠产生更大的撞击力度,从而获得更好的研磨效果。
为什么要设置间歇研磨破碎呢?
间歇研磨是TL2010S组织破碎器一个特色功能之一。设置一定的间歇时间,可以有效减少样品在持续高速研磨破碎中因快速升温而发生降解的情况,为后续实验的顺利进行提供保障。如果配合液氮低温处理,可以更有效地降低样品温升,利于RNA提取等对温度敏感的实验。
最后将快速高效破碎心肺组织的好方法总结成如下公式供大家参考:
快速高效破碎心肺组织的好方法=TL2010S组织破碎器+5ml离心管及适配器+每管3颗直径8mm研磨钢珠+5分钟间歇研磨(每60秒歇10秒,循环5次)
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