目的:
批量研磨玉米叶片,为后续提取核酸,进行遗传或生理生化指标分析研究提供方便。为种子和农产品质量管理部门、种子公司等单位利用分子方法检测样品纯度、检测纯度真实性等实验所必需的样品前处理工作提供参考。
地点:某种业育种和栽培实验室
材料:新鲜玉米幼苗叶片
仪器:主机,TL2020自动冷冻研磨仪(又名TL2020高通量组织研磨仪);配件:2ml研磨适配器,直径3或5mm研磨钢珠
图1:TL2020自动冷冻研磨仪
步骤:
1)取样:取新鲜玉米幼苗叶片,剪成直径6~8mm大小碎片;
2)将3-5片叶片碎片置于2ml离心管(EP管)中,同时加入1颗5mm和2颗3mm不锈钢研磨钢珠。
3)将加入叶片和研磨钢珠的EP管盖严密封,放入TL2020自动冷冻研磨仪的2ml研磨适配器中,然后和适配器一起整体浸入液氮中冷冻2-3分钟或至液氮不“沸腾”为止。
4)使用DHS特制的液氮研磨操作提篮迅速从液氮中取出适配器,并迅速将其固定在研磨仪的摇臂中;
5)设置TL2020的研磨时间为2分钟,研磨频率1500rpm(1500次/分钟)。
结果:
得到非常细碎的叶片粉末,后续提取核酸效果很好。
结论:
用TL2020自动冷冻研磨仪进行玉米叶片的液氮研磨,可以直接将研磨管和适配器浸泡在液氮里,只需一次性1-2分钟的液氮冷冻处理和一次约2分钟的研磨,就能批量粉碎多达56个2.0ml的样品(用96孔深孔板的话则是192个样品)。处理时间迅速,有效防止了温升,为后续有效提取核酸提供了保障。此外,还大大节省液氮,操作也更加安全。
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