化合物脱盐方面的应用

2020/09/24   下载量： 0 次

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检测样本 其他
检测项目
参考标准 脱盐

C18AQ柱在Flash制备纯化样品中的一个典型应用是脱盐操作，即除去样品溶剂中的盐或缓冲液组分，以方便样品应用于后续研究中。在本案例中，某大极性化合物作为样品在C18AQ柱上进行了分离纯化，去除了粗品中所含的盐类杂质，且将样品从水相溶剂中转移至有机相体系中，从而方便了后续的旋蒸等操作，节省了溶剂及操作时间。

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实验部分

1. 样品信息

本案例中所用样品为某合成反应最后一步产物，该反应如图4所示。

图片4.jpg

图4. 本案例中样品的合成反应式。

由图4可知，粗品中除了目标产物之外，还有反应中使用的过量铵盐（四丁基氟化铵，分子量261）存在。为了获得满足纯度要求的目标产物，必须对样品进行脱盐处理。在色谱分离技术中，对于大分子样品，如蛋白质、多肽、核酸等，一般采用基于分子筛原理的凝胶过滤对样品进行脱盐处理。但是针对本案例中分子量仅为252的合成小分子，凝胶过滤很难将目标分子与分子量与其非常近似的盐类杂质区分开来，必须采用其他分离模式。

1. 样品的Flash制备纯化

样品的Flash分离纯化实验参数如表1所示。

表1. Flash制备纯化实验参数设置。

仪器

SepaBean machine 2

分离柱

12 g SepaFlash C18AQ柱

(球形硅胶, 20 – 45 μm, 100 Å, 订货号: SW-5222-012-SP(AQ))

检测波长

254 nm; 220 nm

流动相

溶剂A: 水;

溶剂B: 甲醇

流速

15 mL/min

进样量

0.5 mL (100 mg)

洗脱梯度

时间 (CV)

溶剂B (%)

0

0

20

0

21

100

30

100

结果与讨论

本案例中所用样品具有较大的极性，易溶于水，因其极性太大在正相硅胶柱上保留太强，难以洗脱，故首先排除正相分离模式。在反相分离模式中，若采用常规C18反相分离柱，则因为起始流动相中10%以上的有机相比例的缘故，样品也会很快从分离柱上被洗脱下来，且收集组分中仍含有一定量的盐类杂质，脱盐效果不佳。因此，考虑采用亲水性的C18AQ柱对其进行纯化。

我们设置了台阶梯度，为了确保分子量与目标产物非常接近的盐类杂质被充分去除，维持纯水体系作为流动相运行了约20个柱体积（CV），观察色谱图（如图5所示）可知，在纯水作为流动相时样品被完全保留在C18 AQ柱上。接下来将流动相中的甲醇直接提高至100%，维持此梯度运行10个柱体积，样品在约22.5至24个柱体积时被洗脱下来。收集组分中，样品溶液已从水置换为甲醇，相对于沸点更高的水溶液，显然甲醇更易于在后续的旋蒸处理中被除去，从而获得可用于下一步研究的目标产物。

图片5.jpg

图5. 样品在C18AQ柱上的Flash制备纯化图谱。

与线性梯度相比，台阶梯度可以带来以下好处：

1. 节省分离纯化所消耗的溶剂和运行时间；

2. 目标产物的洗脱峰呈现一窄峰，降低了收集组分的体积，从而方便了后续的旋蒸处理，节省时间；

3. 收集的目标产物溶于甲醇中，溶剂易于被蒸发，从而节省了产物干燥处理的时间。

关于SepaFlash C18AQ反相分离柱系列产品

三泰科技推出的SepaFlash C18AQ反相分离柱系列产品具有多种规格（参见表2）。

表2. SepaFlash® C18AQ反相分离柱参数

（填料:High-efficiency spherical C18(AQ), 20 – 45 μm, 100 Å）

Item Number

Column Size

Sample Size

Flow Rate

(mL/min)

Max Pressure

(psi/bar)

SW-5222-004-SP(AQ)

5.4 g

5.4 mg–108 mg

5-15

400/27.5

SW-5222-012-SP(AQ)

20 g

20 mg–0.40 g

10-25

400/27.5

SW-5222-025-SP(AQ)

33 g

33 mg–0.66 g

10-25

400/27.5

SW-5222-040-SP(AQ)

48 g

48 mg–0.96 g

15-30

400/27.5

SW-5222-080-SP(AQ)

105 g

105 mg–2.1 g

25-50

350/24.0

SW-5222-120-SP(AQ)

155 g

155 mg–3.1 g

30-60

300/20.7

SW-5222-220-SP(AQ)

300 g

300 mg–6.0 g

40-80

300/20.7

SW-5222-330-SP(AQ)

420 g

420 mg–8.4 g

40-80

250/17.2

如需进一步了解SepaBean machine的详细规格信息，或配套使用的Flash分离柱订购信息，请访问ChemBeanGo在线商店：https://store.chembeango.com/。


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文献贡献者

常州三泰科技有限公司
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