方案摘要
方案下载应用领域 | 制药/生物制药 |
检测样本 | 原料药 |
检测项目 | 前处理>其他 |
参考标准 | 分离纯化 |
正相色谱和反相色谱是Flash制备色谱常用的两种分离模式,被广泛应用于各类有机合成产物的分离纯化中。在正相色谱中,采用极性固定相(如带有二醇基、氨基或氰基的固定相及硅胶、三氧化二铝等)并结合使用非极性流动相(如正己烷等),根据分子的极性大小将其分开。由于正相色谱以吸附效应作为分离的基础,因此也被称为吸附色谱。而在反相色谱中,采用非极性固定相(如带有C18基团的硅胶等)配合极性流动相对样品进行分离。这两种分离模式基于不同的分离机理,因此在将两种分离模式联用时可称之为正交色谱分离模式,从而获得对复杂样品更高的分辨力和更好的分离效果。本文中以某合成药物中间体为样品,利用SepaFlash系列正相硅胶柱及反相C18柱联合使用,实现了对样品的高效分离纯化,获得了满足纯度要求的目标产物,为此类复杂样品的快速制备纯化提供了新的思路。
实验部分
样品来自某新药研究公司,首先取微量样品溶于甲醇后进行HPLC纯度分析,参考如图1所示的粗品HPLC分析图谱,可知粗品纯度约为66%,其中有1个杂质成分其保留时间与目标产物非常接近,给后续的分离纯化提出了较高的要求。
图1. 粗品的HPLC分析图谱。
由于样品的极性较大,因此首先考虑采用普通正相硅胶柱对其进行分离纯化。取3 g样品溶于甲醇后,再以6 g硅胶(规格与Flash制备实验中所用硅胶柱填料相同)拌样,利用旋蒸仪除去溶剂后,固体上样至一根与Flash分离柱联用的iLOK®空柱中,Flash制备实验参数如表1所示。正相分离模式的Flash分离图谱如图2所示。
表1. 正相制备纯化实验参数设置。
仪器 | SepaBean® machine T |
色谱柱 | 80 g SepaFlash® Standard Series正相分离柱 |
(不定形硅胶, 40 - 63 μm, 60 Å, 订货号: S-5101-0080) | |
检测波长 | 220 nm;254 nm |
流动相 | 乙酸乙酯 |
流速 | 50 mL/min |
进样量 | 3 g粗品 |
洗脱梯度 | 100%等度洗脱 |
图2. 粗品在正相硅胶柱上的Flash制备图谱。
图3. 粗品经正相硅胶柱分离后收集组分的HPLC分析图谱。
取收集组分进行HPLC分析(如图3所示),结果表明:收集组分的纯度约为92%,与要求的95%以上纯度尚有一定差距。分析图3可知,与目标物具有近似保留时间的杂质未能与目标产物分离开。考虑到反相色谱模式与正相色谱模式的正交性,可以提供额外的分辨力,因此我们对正相分离的收集组分进行旋蒸处理去除溶剂后,取300 mg样品溶于2.5 mL甲醇中,并适当滴加DMSO使其完全溶解,然后采用液体进样的方式利用注射器上样至C18反相分离柱,Flash制备实验参数如表2所示。反相分离模式的Flash分离图谱如图4所示。
表2. 反相制备纯化实验参数设置。
仪器 | SepaBean® machine T | |
色谱柱 | 120g SepaFlash® Bonded Series C18反相分离柱 | |
(球型硅胶, 20 - 45 μm, 100Å, 订货号: SW-5222-120-SP) | ||
检测波长 | 220 nm;254 nm | |
流动相 | 溶剂A:水; | |
溶剂B:甲醇 | ||
流速 | 30 mL/min | |
进样量 | 2.5 mL (300 mg) | |
洗脱梯度 | 时间 (CV) | 溶剂B (%) |
0 | 60 | |
8 | 80 | |
12 | 80 | |
12.5 | 100 | |
13.5 | 100 |
图4. 正相硅胶柱分离后收集组分在C18反相柱上的Flash制备图谱。
取收集组分进行HPLC分析,结果表明:收集组分的纯度约为98%,满足制备要求,可以用于客户的进一步研究和开发中。
结论
本案例表明,结合正相色谱与反相色谱,可以有效地提高Flash制备过程的分辨力,尤其适合于一些复杂样品的分离纯化,完成普通单一模式的正相色谱或反相色谱无法完成的制备任务。同时,与制备级HPLC相比,Flash制备色谱在色谱柱成本方面具有极大的优势,不失为广大研究人员经济高效的纯化解决方案。
关于SepaFlash® 正相硅胶柱和C18反相柱系列产品
三泰科技推出的SepaFlash® Standard Series正相硅胶柱和SepaFlash® Bonded Series C18反相柱系列产品具有多种规格(参见表3和表4)。
表3. SepaFlash® Standard Series正相分离柱参数
Item Number | Column Size | Sample Size | Flow Rate (mL/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
S-5101-0004 | 4 g | 4 mg - 0.4 g | 15-40 | 300/20.7 |
S-5101-0012 | 12 g | 12 mg - 1.2 g | 30-60 | 300/20.7 |
S-5101-0025 | 25 g | 25 mg - 2.5 g | 30-60 | 300/20.7 |
S-5101-0040 | 40 g | 40 mg - 4.0 g | 40-70 | 300/20.7 |
S-5101-0080 | 80 g | 80 mg - 8.0 g | 50-100 | 200/13.8 |
S-5101-0120 | 120 g | 120 mg - 12 g | 60-150 | 200/13.8 |
S-5101-0220 | 220 g | 220 mg - 22 g | 80-220 | 150/10.3 |
S-5101-0330 | 330 g | 330 mg - 33 g | 80-220 | 150/10.3 |
S-5101-0800 | 800 g | 800 mg - 80 g | 100-300 | 100/6.9 |
S-5101-1600 | 1600 g | 1.6 g - 160 g | 200-500 | 100/6.9 |
S-5101-3000 | 3000 g | 3.0 g - 300 g | 200-500 | 100/6.9 |
SepaFlash® Phenyl 色谱柱在苯二氮卓类药物化合物的分离纯化
应用于糖类化合物的分离纯化
应用于含硼有机光电材料领域分离纯化
相关产品
SepaBean machine 2快速制备液相色谱
SepaBean machine U200快速制备液相色谱
SepaBean machine U100快速制备液相色谱
SepaBean machine快速液相制备色谱
SepaBean machine T快速液相制备色谱
SepaBean machine 2快速液相制备色谱系统V2.0
SepaBean machine T快速液相制备色谱系统 V2.0
SepaBean machine U200快速液相制备色谱系统 V2.0
SepaBean machine U100快速液相制备色谱系统 V2.0
SepaBean machine 快速液相制备色谱系统 V2.0
三泰E系列SepaFlash快速液相制备色谱柱
三泰 超大内径分离柱 制备柱全新升级
三泰 超大内径分离柱 Silica柱
高效系列 SepaFlash快速液相制备色谱柱
键合相系列 SepaFlash快速液相制备色谱柱
关注
拨打电话
留言咨询