方案摘要
方案下载应用领域 | 制药/生物制药 |
检测样本 | 原料药 |
检测项目 | |
参考标准 | / |
脂质体(liposome)是一种人工膜,是由卵磷脂和神经酰胺等制得的脂质体(空心),具有的双分子层结构与皮肤细胞膜结构相同。脂质体具有靶向性和淋巴定向性、缓释作用、降低药物毒性以及提高稳定性等特点,使脂质体具有广泛的应用。主要应用于转基因、药物递送,还可用作将染料递送至纺织品、杀虫剂至植物、酶和营养补充剂至食物以及化妆品至皮肤的载体等,具有广阔的应用领域。本案例中主要以来自某生物医药公司的脂质体样品为例,对其分离纯化方法进行简单的介绍。
SepaBean machine快速制备液相色谱系统
应用于脂质体类化合物分离纯化应用案例
脂质体(liposome)是一种人工膜,是由卵磷脂和神经酰胺等制得的脂质体(空心),具有的双分子层结构与皮肤细胞膜结构相同。脂质体具有靶向性和淋巴定向性、缓释作用、降低药物毒性以及提高稳定性等特点,使脂质体具有广泛的应用。主要应用于转基因、药物递送,还可用作将染料递送至纺织 品、杀虫剂 至植物、酶和营养补充剂至食物以及化妆品 至皮肤的载体等,具有广阔的应用领域。本案例中主要以来自某生物医药公司的脂质体样品为例,对其分离纯化方法进行简单的介绍。
样品信息
来自某生物医药公司脂质体,样品呈白色粉末状,纯度98%,想要提高纯度至99.5%,溶解性较差,采用二氯甲烷加甲醇进行超声加热溶解(温度低于60度),且样品紫外吸收较弱,需要连接ELSD进行检测,因此采用SepaBean machine快速液相制备色谱系统搭配ELSD检测器进行分离纯化。
实验方案
先采用HPLC液相检测,根据其液相谱图确认进一步分离纯化方法,液相谱图结果为目标产物为 RT=12.918的峰,纯度98.4%,详情如图1所示。
图1.HPLC液相谱图
根据液相方法及结果进行进一步分离纯化的实验参数设置如表1所示。
表1. Flash制备实验参数
SepaBean machine标准型 + ELSD | ||
分离柱 | 120g SepaFlash键合相C18(40-63 µm, 100 Å, 订货号:SW-8201-120-IR) | |
检测波长 | 220 nm;254 nm;ELSD | |
流动相 | 溶剂A:水 溶剂B:甲醇 | |
流速 | 40ml/min | |
进样量 | 110mg | |
洗脱梯度 | 时间 (min) | 溶剂B (%) |
0 | 70 | |
20 | 90 | |
35 | 100 | |
50 | 100 |
结果与讨论
该脂质体类样品由于其溶解性很差,因此降低上样量,上样量110mg,采用120g C18分离柱(40-63 µm, 100 Å, 订货号:SW-8201-120-IR)进行分离纯化。从分离谱图可以看出,该物质紫外吸收较弱需要借助ELSD检测器进行检测,从分离谱图看其分离效果较好,目标组分满足客户检测纯度要求。此次解决方案采用的是三泰科技的键合相系列色谱柱,仪器是SepaBean machine标准型制备液相色谱系统搭配ELSD检测器,为紫外吸收较弱的脂质体类化合物提供更多的分离纯化方案,同时也为其他种类紫外吸收较弱的化合物的分离纯化提供参考。
SepaFlash键合相系列分离柱订购信息
无定形C18,粒径40–63µm,孔径60Å
(碳含量17%,封端,比表面积500m2/g,上样量0.1–2%)
产品编码 | 柱尺寸 | 上样量 | 流速(ml/min) | 柱长度(mm) | 柱内径(mm) | 最大工作压力(psi/bar) |
SW-8201-004-IR | 5.9 g | 5.9 mg–118 mg | 10–20 | 113.8 | 12.4 | 400/27.5 |
SW-8201-012-IR | 23 g | 23mg–0.46g | 15–30 | 134.8 | 21.4 | 400/27.5 |
SW-8201-025-IR | 38 g | 38 mg–0.76 g | 15–30 | 184 | 21.4 | 400/27.5 |
SW-8201-040-IR | 55 g | 55 mg–1.1 g | 20–40 | 184.4 | 26.7 | 400/27.5 |
SW-8201-080-IR | 122 g | 122 mg–2.5 g | 30–60 | 257.4 | 31.2 | 350/24.0 |
SW-8201-120-IR | 180 g | 180 mg–3.6 g | 40–80 | 261.5 | 38.6 | 300/20.7 |
SW-8201-220-IR | 340 g | 340 mg–6.8 g | 50–100 | 223.5 | 61.4 | 300/20.7 |
SW-8201-330-IR | 475 g | 475 mg–9.5 g | 50–100 | 280.2 | 61.4 | 250/17.2 |
※ 兼容市场上所有快速液相制备色谱系统。
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