方案摘要
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目的:对人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)进行基因突变,构建GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-4T/(Val8)hGLP-1,并在大肠杆菌中诱导表达。方法:选择大肠杆菌偏爱密码子,将hGLP-1(7~37)第2位的丙氨酸(Ala8)定点突变为缬氨酸(Val8),直接生物合成4个寡聚核苷酸片段并进行基因拼接,形成完整的hGLP-1突变体基因(Val8)hGLP-1,并连接到载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,BamH I与Xho I双酶切电泳鉴定与序列测定,然后诱导表达其融合蛋白。结果:经酶切电泳鉴定与测序分析,证实所合成的突变体基因(Val8)hGLP-1已克隆到pGEX-4T-1中,经SDS-PAGE分析可以诱导表达出融合蛋白。结论:成功地构建了GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-4T/(Val8)hGLP-1,为进一步获得重组hGLP-1蛋白奠定基础,为产业化规模制备hGLP-1突变体提供实验依据。
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