流式分析细胞凋亡 - 续再续

北京德泉兴业商贸有限公司

2016/12/23 11:13

上次讲到：“流式细胞仪的fsc结合ssc就能识别凋亡细胞这一形态学上的变化！尽管基于fsc、ssc对凋亡细胞的分辨特异性并不像annexin v - fitc / pi那么强，但两个散射光参数的组合不失为一种简单、快速且经济（无需对样品进行过多处理、不需要额外购买试剂）的初步评估实验变量引起细胞凋亡的参考方法！”
这个方法不严谨、缺陷的地方在于fsc、ssc发生变化的群体实际对应的是坏死细胞（下图中红色群体），之所以说它能用来初步评估凋亡的依据在于体外培养细胞ps外翻后并没有其他细胞识别吞噬，细胞只能启动二级坏死，即体外培养细胞凋亡之后的下一阶段是二级坏死！
QQ图片20161223110308.png 需知凋亡现象的发现是得过诺贝尔奖的！当年几位科学家在模式生物线虫上发现并阐明了凋亡现象及机制，恰逢人类基因组计划完成，科学家将线虫凋亡相关基因与人类基因图谱进行比对发现：凋亡这一现象在进化上是高度保守的（线虫上ced对应人类的caspase）！
ps外翻实际上是凋亡相对后期的一个分子行为，那么凋亡是如何启动的？在内源性通路中bcl家族促凋亡蛋白bax、bak形成复合物后结合到线粒体膜表面，使线粒体膜通透性改变，线粒体中一系列氧化还原反应电子转移“中间物”细胞色素c释放（王晓东教授所发现），引起线粒体膜电位发生变化，流式细胞仪结合jc-1即可观察这一现象（如下图），从图上也可以看出随线粒体膜电位变化（凋亡进行），fsc、ssc的变化！
QQ图片20161223110321.png

50 μm槲皮素诱导细胞凋亡：a ( 0 ), b ( 6h ), c ( 12h ), d ( 24h )

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