上周我们介绍了Amersham Typhoon™在染色质复制相关研究中的应用,本周我们来看一下Amersham Typhoon在转录后调控中的应用。
mRNA和长非编码RNA(LncRNA)的甲基化在病毒、细菌、动植物中普遍存在,并影响mRNA的加工、翻译及稳定性,参与细胞发育、分化以及热激转录等多个重要的生理过程。
RNA甲基转移酶和去甲基化酶可以在mRNA和LncRNA上引入或去除N6-甲基腺苷(m6A),调控其甲基化状态。RNA甲基转移酶能够有效催化甲基转移,研究表明RNA甲基转移酶由METTL3和METTL14构成,但各亚基具体功能尚未明确。
发表在Nature上的文章“Structural basis of N6-adenosine methylation by the METTL3–METTL14 complex”里,通过METTL3-METTL14异二聚体与配体(S-腺苷甲硫氨酸)共结晶,发现METTL3和METTL14均采用I级MTase折叠,并通过广泛的氢键相互作用,产生带正电荷的凹槽,推测该富含正电凹槽为RNA结合区。同时S-腺苷甲硫氨酸只与METTL3结合,而与METTL14不结合。
将预测的RNA结合区内正电氨基酸突变为不带电或带负电氨基酸,用32P标记RNA,进行EMSA实验,验证RNA与蛋白复合体的结合,实验结果用Typhoon进行成像分析。发现当该区域氨基酸突变后,RNA与METTL3和METTL14复合体的结合减少,表明该富含正电沟槽为RNA结合区。结合其他实验证明,在m6A MTase复合物中,METTL3结合S-腺苷甲硫氨酸,催化甲基转移,而METTL14提供结合RNA的支架平台。
本周的分享就到这里了,希望对大家有所帮助。
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