图 1:发酵液膜后滤液在线检测平台
简介
材料和方法
仪器和附件
➢ UV7 紫外可见分光光度计
➢ 天平(ME4002E)
➢ PendoTECH 压力传感器
➢ 相应连接管路
➢ LongerPump 蠕动泵
➢ MA1HC027H1深层过滤膜包(一级膜和二级膜)
➢ 1.0cm光程流通池
➢ LabX
样品和试剂
➢ 发酵液
➢ Tris-HAC缓冲液
➢ 去离子水
在线平台搭建
蠕动泵+过滤膜包+UV7
过滤膜包后管路与流通池连接,流通池出液口下方由浊度杯收集,进行离线检测,如图 1 所示。
不同浊度发酵液样品(一级膜测试)
• 发酵液离心获取上清液(39.7NTU),作为稀释液
• 用上步稀释液对发酵液原液进行稀释,如表1 所示(使用 Hach2100Q 检测不同稀释样品的浊度)
不同浊度发酵液样品(二级膜测试)
• 使用 Tris-HAC 缓冲液对发酵液进行不同浓度的稀释,如表 1 所示
测量步骤
• 先使用离线的方法,对制备的不同浊度的样品进行吸光度 A 的检测,并使用二次曲线拟合方式获得,吸光度与浊度关系曲线,如图3、图 4 所示;
• 获得浊度标准曲线后,按照下面所列的定量检测方法参数,以每 min 读取一次数值获得在线动态检测膜后发酵液的浊度(NTU)值;
• 获得浊度(NTU)数值后,以生物载量(L/m2)为横坐标,浊度(NTU)为纵坐标,绘制两者相互关系图,观察浊度动态曲线图,以评估3 种检测方法的浊度变化趋势,同时对比三种方法几个数据采集点的浊度(NTU)数值。
结果
Y=94.19302X2+81.21537X+36.77241,线性相关系数 R2=0.987;
获得二级膜膜后发酵液浊度(NTU)与吸光度A 的标准曲线
Y=464.00293X2+290.75055X-0.04805,线性相关系数 R2=0.999
参考资料:
[1] 高云华,徐守军,刁天喜. 抗体药物研
究进展[J]. 中国新药杂志, 2014, 23(20):2414-2417.
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