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应用领域	生物产业
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参考标准	吸光度与浓度

Biotek吸收光酶标仪：体积小巧做工结实耐用各项性能优异有触屏可选高端的微孔板分光光度计

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核酸是一切生物都含有的存在于细胞核的重要成分, 是生命现象中不可缺少的生物大分子, 也是生物遗传信息的载体,它控制着蛋白质的合成和有机体细胞的机能, 在生物的生长、发育、繁殖、遗传和变异等生命活动中占有极其重要的地位. 随着分子生物学的广泛应用, 核酸定量已经成为一种常规化的实验手段。

核酸定量原理：

DNA/RNA 的分光光度法测定

DNA 或RNA 的分光光度法测定核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA如：1OD 的吸光值分别相当于50μg / mL 的dsDNA，37μg / mL 的ssDNA， 40μg/mL 的RNA，30μg/mL 的寡核苷酸。为了保持定量结果稳定，样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）要求吸光值最好在0.1-1.5 A。

分光光度计显示的比值表示样品的纯度，蛋白的吸收峰是280 nm，纯净的样品260/280 nm比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。假如比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、酚盐离子或硫氰酸盐等，较纯净的核酸A260/A230 的比值大于2.0 。A320 检测溶液的颗粒度、混浊度和其他干扰因子。纯样品的A320一般是 0。水饱和酚在270nm 处有特征吸收，无酚的核酸制品A260/A270 比值约为1：2。

DNA/RNA的荧光测定

用荧光测定法分析核酸浓度操作简便而且比分光光度法灵敏，可测定纳克级水平的DNA。Hoechst33258 对小分子DNA 的结合能力较弱，这种方法只能用来测定长度超过1kb的DNA 溶液的浓度。测定时，将浓度已知和未知的DNA 制品与荧光染料保温，把未知样品的吸收值与一系列浓度已知样品的吸收值相比较，得未知样品的浓度。

Picogreen 染料是一种新型的dsDNA 染料：其检测灵敏度高，可检测到pg 级DNA；检测范围宽，可跨越４个数量级；特异性好，基本不受ssDNA 和RNA 的影响，并且可以耐受一定浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白等干扰。目前使用Picogreen 染料定量检测DNA 已经广泛用于生物学检测，并被2010 年版《中华人民共和国药典》选为药物残留DNA 定量方法。

当样品DNA 含量不足以通过分光光度法测定，DNA 严重污染有吸收紫外射线的其他杂质而妨碍准确测定，一个快速的办法是利用溴化乙锭嵌入DNA 分子中后由紫外激发的荧光来估测这种样品中DNA 的含量。由于荧光强度与DNA 总量成正比，可通过比较样品和一系列标准溶液产生的荧光估测DNA 含量。

RiboGreen RNA 定量试剂是一种超灵敏的核酸荧光染料，使用这种染料可以对溶液中的RNA 进行简单快速的定量。当RiboGreen 荧光染料处于溶液状态时，其几乎没有荧光活性；当RiboGreen 与RNA 结合，其荧光活性将增加1000 倍。RiboGreen-RNA 复合物的荧光激发波长约500nm，发射波长约525nm。使用RiboGreen 荧光染料可以检测到2.5ng/mL的RNA，这比260nm 吸收法要高出千倍。

Biotek核酸定量解决方案

对于样品较纯（即蛋白质、酚、琼脂糖以及其他核酸等杂质含量较低时），可通过微孔板分光光度法测定其吸收紫外线的量，既简便又准确，使用Biotek—Eon、Epoch、Epoch2微孔板分光光度计可以得到精确的数据，并且可选配Take3微量检测板进行高通量超微量核酸定量，最多一次48个样品、最少上样量2μl。