近期,一篇文章报道了巨噬样细胞的SAMHD1基因编辑最新进展,揭示了SAMHD1磷酸化调控、HIV-1限制和细胞dNTP水平之间的复杂关系。
作者报道了BLaER1细胞作为一种新的人类巨噬样细胞HIV-1感染模型结合CRISPR/Cas9敲入(KI)技术将特异性突变引入 SAMHD1位点以研究生理背景下的突变。转分化的BLaER1细胞含有活性去磷酸化的SAMHD1,可阻断HIV-1报告病毒的感染。正如预期的那样,纯合子T592E突变,而不是T592A,缓解了HIV-1逆转录的阻滞。将VLP-Vpx共同递送到SAMHD1 T592E KI 突变细胞中并没有进一步增强HIV-1感染,这表明缺乏独立于T592去磷酸化的SAMHD1介导的额外抗病毒活性。T592E KI细胞保留的dNTP水平与WT细胞相似,表明SAMHD1的抗病毒和dNTP酶活性解耦。SAMHD1中催化位点的完整性对于抗病毒活性至关重要,然而在携带催化核心突变的细胞中观察到HIV-1 限制与整体细胞dNTP水平的低相关性。总之,强调HIV-1限制,SAMHD1酶功能和T592磷酸化调节之间关系的复杂性,为内源性和生理背景下的研究提供了新的工具。
图3. CRISPR/Cas9敲入产生SAMHD1突变体的流程
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