鸭ELISA试剂盒操作步骤

上海酶联实业有限公司

2014/11/28 15:29

鸭ELISA试剂盒操作步骤；

鸭病毒性肠炎（DVE），又名鸭瘟（DP）是由鸭病毒性肠炎病毒（DEV）引起的鸭、鹅及多种雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病。传播迅速，发病率和死亡率都很高，给我国养禽业造成巨大的经济损失。在鸭病毒性肠炎的免疫预防工作中，接种了鸭病毒性肠炎疫苗后，由于多种因素可能导致免疫鸭不产生或产生低水平鸭病毒性肠炎病毒抗体。
gB蛋白是病毒的囊膜蛋白，具有吸附、穿入、融合细胞以及细胞间传播功能，具有良好的反应原性及免疫原性，诱导机体产生高水平的体液和细胞免疫反应。本试剂盒采用酶联免疫吸附试验检测鸭血清中抗鸭病毒性肠炎病毒gB蛋白抗体IgG。用于免疫鸭病毒性肠炎疫苗后的抗体动态水平监测，指导免疫预防工作，评估鸭病毒性肠炎免疫状况，也可用于该病的流行病学调查。

实验步骤

需要自备的器材；微量移液器，微量移液器配套使用的枪头，用来稀释洗涤液的500ml量筒，适用于检测96T微孔板的酶标仪，用于稀释样品的1.5ml Ep管，蒸馏水或去离子水。

样品的制备；用样品稀释液将待检血清样品进行100倍稀释（建议：2μl血清样品加入198μl样品稀释液中），样品加入包被板前要充分混匀，稀释不同待检样品注意更换枪头。注意：①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生；②不能稀释阴性、阳性对照。

操作步骤；在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照；在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照；取100μl经1：100稀释好的待检样品加入相应孔中，并做好记录；37℃孵育1h；将各孔的液体弃入废液桶，每孔加250μl的洗涤液（试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释）进行洗板，重复5次，每次30s；加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果，尽量将孔内洗涤液抛甩干净；每孔加100μl酶标结合物；37℃孵育1h；重复步骤3.5；每孔加100μl底物液；37℃孵育10min（避光显色）；每孔加100μl的终止液；立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值，即OD450值。

试验有效性判断；阴性对照：正常情况下，阴性对照孔OD450值≤0.2；阳性对照：正常情况下，阳性对照孔OD450值≥0.4；临界值(C.O.)计算：临界值=0.2+阴性对照均值；阴性对照OD450值大于0.2时应舍弃，如所有阴性对照OD450值均大于0.2时须重复实验；阴性对照低于0.05时以0.05计算。

结果判定：检测样品OD450值≥临界值，判定该检测样品为阳性；检测样品OD450值＜临界值，判定该检测样品为阴性。

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