方案摘要
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.薄膜准备:将薄膜切成2×8cm(或2.5×7cm)的小片,在薄膜的无光泽面一端1.5cm处用铅笔轻轻划一横线,表示点样位置,将薄膜浸入巴比妥缓冲液中充分浸透(浸泡5~10分钟或预先浸泡好,随时取用)后取出,夹于滤纸中,吸去多余的溶液。 2.点样:用血清加样器于无光泽面点样(微量吸管或玻片),沾取血清后垂直轻轻接触加样处,让血清吸入膜内,再拿开加样器。 3.平衡:待血清渗入薄膜,将薄膜无光泽面向下,两端平贴在铺有滤纸或纱布的电泳槽支持板上(加血清的一端贴在电泳槽阴极端)加盖,静置10分钟,使薄膜中的液体获得平衡。 4.电泳: 电压:约110~140V(或相当于电场强度10V/cm)。 电流:0.4~0.6mA/cm宽 时间:45~60分钟。 5.染色:电泳停止,关闭电源,将薄膜从电泳槽中取出,直接浸入氨基黑染色液中,染色3~5分钟,从染色液中取出薄膜,浸入漂洗液中漂洗脱色数次,至薄膜背景完全无色为止,取出薄膜用滤纸吸干。 6.定量:将漂洗后的薄膜夹于滤纸中吸干,剪下各蛋白区带,分别置于试管中,另于空白区剪一平均大小的薄膜放入空白管中,清蛋白管中加0.4MNaOH4ml,其余各加5ml,反复振摇使其充分洗脱,放30分钟后比色(波长650nm),以空白管调光密度到0点,读记各蛋白质的光密度值。 光密度总和(T)=2A α1 α2 β γ A清蛋白%=(2A/T)×100% α1球蛋白%=(α1/T)×100% α2球蛋白%=(α2/T)×100% β球蛋白%=(β/T)×100% γ球蛋白%=(γ/T)×100% 7.透明保存:将染色漂洗后晾干的薄膜条浸入新鲜配制的透明液中经2~3分钟,贴在玻璃板上,干后即成透明薄膜,可保存或用吸光度计直接测定各区带的吸光度。 注:容易产生的几种现象
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