传染性疾病的个性化诊断:需要持续监测疾病的动态发展,目前推荐的临床策略即收集患者的关键生物标志物的多重数据,并对其进行纵向频繁监测。现在诸多技术,如流式细胞术、静态显微镜等,都可以进行样本监测分析,但是检测量有限,无法满足生物标志物多重检测的需求,而且设备操作和数据处理都很复杂。我们需要一种设计简洁,数据处理简单,可同时针对多种物种的生物标志物靶向的检测方案。
作为一种迭代性的工具,阻抗细胞术设计简洁,可直接或间接对微米及纳米级样本颗粒进行检测而不破坏样本,已广泛应用于多个领域,尤其是细胞状态评估和疾病诊断。然而, 该技术在识别多个物种时,需要在准确性和快速分析之间进行权衡。这对于复杂疾病进行个性化患者分层,需要同时多重生物标志物检测来讲,仍然存在困境。
来自新泽西州立大学的Brandon K Ashley团队研究了一种新的多路阻抗细胞术机制,采用电敏感微粒,使用单一检测源靶向、识别白细胞上的膜受体,相关研究成果以“Antibody-functionalized aluminum oxide-coated particles targeting neutrophil receptors in a multifrequency microfluidic impedance cytometer“为题,于2022年发表在《Lab chip》上。
这项研究使用了一种涂有不同厚度金属氧化物(10nm和30nm的Al2O3)的Janus颗粒(metal oxide-coated Janus particles,MOJPs),当它进入电场时,会置换相同体积的电介质液体,改变系统的阻抗,产生可量化检测的阻抗偏移。每个MOJP在不同的输出频率下都有一个特定幅度的偏移,使用多频阻抗细胞术,可以通过一种共面电极方案快速测量和区分这些颗粒。研究者用CD11b抗体功能化10nm厚度的MOJPs,用 CD66b抗体功能化30nm厚度的MOJPs,然后将颗粒与分离的中性粒细胞结合以测量受体的表达,所得结果同时与流式细胞检测结果进行对比。研究发现包括多元分析、监督机器学习和无监督机器学习在内的数据分析技术的组合能够准确区分样本,准确率高达91%。
本研究中流式分析检测采用了Orflo Technologies公司的Moxi Go II快速流式细胞仪。按照厂商提供的protocol,将20μL等分的FITC-CD66b抗体或PE-CD11b抗体溶液加入到100μL 1X PBS(约1.0x105个细胞/mL)稀释的中性粒细胞中,避光孵育。在Moxi Go II上选择“Open Flow Cytometry”,选择FITC通道和PE通道,在设备完成自动校准后,上样60μL样品。检测结果如图1和表1所示。
图1. Moxi Go II检测结果:CD11b表达(用藻红蛋白或PE染色)和CD66b表达(用异硫氰酸荧光素或FITC染色)的流式细胞检测散点图
No expression (Q1) | CD11b+ only (Q2) | CD66b+ only (Q3) | CD11b+ & CD66b+ (Q4) |
35.3% | 27.7% | 4.3% | 32.7% |
表1. Moxi Go II检测结果:CD11b、CD66b受体单独表达或都表达的中性粒细胞百分比
这项概念研究证明了氧化物涂层颗粒对特定白细胞计数的潜力,不同的涂层厚度或不同的金属氧化物材料,有望在同一样品中测量不同的细胞和不同的细胞受体。此系统样本处理简单,可以更快速,更自动化地分析生物标志物,具有更高的多重分析潜力,可能会改善重症监护中的疾病诊断。
Moxi GO II采用库尔特原理进行细胞计数和粒径测量,同时采用488nm激光光源,结合两个PMT通道,525/45nm通道和561nm/LP(或者646nm/LP,可根据需要更换),进行细胞活率、细胞凋亡、转染效率、活性氧簇、线粒体膜电位等常规流式检测。
仪器设计小巧轻便,无需预热,开机即用,预设程序,触屏操控,运行后10秒即可给出测试结果,使用后也无需清洁维护。无论是经验丰富的流式专家,还是初试身手的实验小白,Moxi Go II都可以助您轻松完成实验。
环亚生物,生命科学产品全国性代理商,不断把国外顶级的创新产品引入中国。环亚生物具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为Orflo Technologies大中华区独家代理商,负责Orflo产品大中华区的营销和售后支持。
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https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2022/lc/d2lc00563h
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