人 (Human) 晚期糖基化终末产物 (AGEs) ELISA 检测试剂盒

2015-01-29 09:53 下载量：1

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人 (Human) 晚期糖基化终末产物 (AGEs) ELISA 检测试剂盒　　　　　　　试验原理：　　　　AGEs试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知AGEs浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将AGEs和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中AGEs的浓度呈比例关系。　　　　试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置配制 96/48人份酶标板 1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖 1块半块即用型标准品：400ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空转移趋化生长因子β1对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗AGEs抗体 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml）即用型自备材料蒸馏水。加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振荡器及磁力搅拌器等。安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行： 400 ng/ml （6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 200 ng/ml （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 100 ng/ml （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 50 ng/ml （3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 25 ng/ml （2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 12.5 ng/ml （1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 0 ng/ml （空转移趋化生长因子β1对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

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文献贡献者

上海基免实业有限公司

银牌会员 | 第4年

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