黄瓜花叶病毒(CMV)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书

2015-03-19 16:31  下载量:1

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使用目的: 本试剂盒用于测定植物组织,细胞及相关液体样本中黄瓜花叶病毒(CMV)表达。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中黄瓜花叶病毒(CMV)表达。用纯化的黄瓜花叶病毒(CMV)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中黄瓜花叶病毒(CMV)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的黄瓜花叶病毒(CMV)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中黄瓜花叶病毒(CMV)的存在与否。操作步骤 1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀, 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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