大鼠γ干扰素(INF-γ)ELISA试剂盒说明书

2015-04-09 15:35  下载量:1

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实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠γ干扰素(INF-γ)水平。用纯化的大鼠γ干扰素(INF-γ)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(INF-γ),再与HRP标记的γ干扰素(INF-γ)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(INF-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠γ干扰素(INF-γ)浓度。 试剂盒组成:操作步骤: 1. 加标准品:在酶标包被板上设标准品孔12孔,浓度依次由低到高或者由高到低,每孔加标准50ul,每个浓度做两个平行孔。 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。 8. 洗涤:操作同5。 9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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