应用指南—质谱-制备联用，实现由质谱介导的天然产物馏分收集

北京博晖创新生物技术股份有限公司

2023/07/11 08:52

在纯化过程中，Flash色谱法通常使用 UV 检测器作为检测化合物的主要方法。虽然紫外吸收广泛适用于很多类别的化合物，但它对混合物中的单个化合物的特异性有限，并且无法检测无紫外吸收的化合物。

通过建立质谱-制备联用的实验方法，实现质谱定向馏分收集，帮助用户解决无紫外吸收化合物的分离纯化，从而简化整个纯化过程。本应用案例介绍了在快速制备色谱过程中通过 MS 定向馏分收集，并从姜黄素类化合物中分离天然产物的方法。为确认方法准确性，分离的化合物将通过大气压直接进样分析探头( ASAP )质谱进一步确认。

图1 puriFlash® 5.250 纯化系统 & expression® CMS小型台式质谱仪 & puriFlash® Active Splitter 质谱接口

01 姜黄素类化合物介绍

姜黄素是姜黄根（Curcuma longa）中发现的主要姜黄素类物质。它通常被用作膳食补充剂和化妆品的成分，在烹饪菜肴中调味，以及黄橙色的食用色素。据报道，姜黄素具有抗氧化和抗炎症活性。

在姜黄根 (Curcuma longa) 中发现了三种主要的姜黄素：姜黄素 (I)、二甲氧基姜黄素 (II) 和双去甲氧基姜黄素 (III)。将姜黄粉 (57.3 g) 溶解到 500 mL 乙醇中，然后通过滤纸过滤并浓缩，得到 6.4 g 姜黄素的粗提物。TLC 板信息显示二氯甲烷:甲醇（ 97:3）是最佳分离条件。

图2 姜黄提取物信息

02 TLC 方法开发

首先在 TLC 板上分析姜黄提取物，然后将方法转移到 puriFlash® 5.250 纯化系统。在 254 nm 处检测到四种化合物，在 427 nm 处检测到三种类姜黄素，但是，结果显示，UV 检测对单个化合物没有特异性（图3）。

图3 姜黄提取物(97:3 DCM:MeOH)在 365 nm 条件下的 TLC 分析以及 puriFlash® 5.250 的色谱图

03 实验方法-TLC-Flash方法转移

TLC-Flash 进行方法转移：在 Interchim puriFlash 5.250 上进行粗提物纯化（球形硅胶柱 (PF-15SIHC-F0012)）。将 32 mg 的粗提物与 250 mg 硅胶混合并装入 4 g Dry-load 柱中 (PF-DLE-F004)。在APCI 离子源负离子模式下，通过 XIC 模式监测收集每种目标化合物的馏分。