方案摘要
方案下载应用领域 | 生物产业 |
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AMPPD发光显色试剂盒操作步骤 自备材料: 1、转印了蛋白并已以抗体-酶复合物检测过的PVDF 膜 2、Tris 盐缓冲液(TBS) 3、透明的塑料保鲜膜 4、蒸馏水 操作步骤(仅供参考): 1、临用前,取适量的A1 和A2,等量混合后获得Dioxetane Buffer。 2、按 2.5mgAMPPD 溶于25ml Dioxetane Buffer, 配制0.1mg/ml AMPPD 底物溶液即为AMPPD Dioxetane Buffer(发色发光显迹液),用于膜的染色。 3、取适量Dioxetane Buffer 洗膜两次,每次15min。 4、对于 PVDF 膜进行的碱性磷酸酶反应, 膜置于新鲜配制的AMPPD Dioxetane Buffer作用5min。 5、将膜移入适量的AMPPD Dioxetane Buffer 中,浸泡5min(AP 反应)。 6、取出 PVDF 膜,滴干水分,将膜正面朝下放在一张透明的塑料保鲜膜上,向后折叠将膜包裹起来,成为不漏水的封闭体。 7、在暗房中,将膜正面朝下放在感光胶片上,曝光数秒至数小时。 8、如需要,在室温下以适量的TBS 洗膜15min。 9、将膜放入AMPPD Dioxetane Buffer,条带应在10~30min 内出现。 10、用蒸馏水洗膜,终止反应。晾干后拍照留永久的记录。 注意事项: 1、PVDF 膜置于胶片上后,不要改变位置。 2、曝光时间应根据实验情况,自行摸索。 3、配制好的AMPPD Dioxetane Buffer,应避光低温保存。 4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期: 12 个月有效。 南京森贝伽生物科技有限公司
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