供货周期: | 现货 |
品牌: | 诚凛生物 |
型号: | 48T/96T |
货号: | CL-D3269 |
CAS号: | 电询 |
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【中文名称】:小鼠促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒
【英文名称】:Mousegrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISAKit
【产品货号】:CL-D3269
【产品规格】:96T/48T
【保存条件】:2-8℃低温保存
【保质期】:6个月,提供试剂盒最新批次
小鼠促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒ELISA检测中常用的酶底物
②终止液:2 mol/L硫酸(含0.1 mol/L亚硫酸钠);③测定波长:492nm。
TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。其氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数,如果HRP量少,过氧化氢溶液和TMB过量时,则形成蓝色的阳离子根。降低pH,即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌(图4—3)。小鼠促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min,但随后本底显色就不断加深,国内有人认为使用1%SDS作为终止剂,可使鲜蓝色24h内保持不变,阴阳性对比十分明显,但在我们实验室发现1%SDS对上述显色有较强的褪色作用,目前仍以硫酸作为终止剂较为理想。ELISA中,底物反应显色后,常选择其具最大吸收的波长450nm比色测定结果。而’Madersbacher和Berger等为提高以TMB作底物的ELISA测定的敏感性,选择显色呈指数加深时的波长405nm比色测定。他们首先测定一系列已知浓度的标准品在450nm和405nm的值,证实A450nm/A405nm之比为3.2,然后在使用波长405nm测定含低浓度待测物的标本得到的OD值再乘以常数3.2,即为待测标本在波长450nm处的真值。该种双波长测定方法可使ELISA测定范围提高3倍。TMB的显色反应虽与OPD一样同属氧化还原反应,但前者的反应是可逆的,如终止液中存在还原剂(维生素C及亚硫酸钠、SDS等),则可反应显色迅速消退。TMB虽然溶解度相对较低,但由于其高检测敏感性及无致突变作用,现已基本上取代了OPD而成为HRP最为常的色原底物。
在商品ELISA试剂盒尤其是国内的产品中,TMB色原底物常为已配好的A及B两种液态试剂,其中一种是含一定浓度过氧化氢的溶液,一种为TMB溶液,鉴于过氧化氢、TMB在溶液中相对不稳定的特点,因此,我们在使用ELISA试剂盒时,如发现底物A和(或)B出现颜色,或二者各取一滴混合后显色,说明该试剂盒的底物溶液已变质或已受污染,必须废弃。
在ELISA测定时,TMB色原底物的具体配方为①显色底物溶液:先将TMB以0.1 mol/L的浓度溶于二甲亚砜,然后,再将其以1 mmol/L和H202以3.0 mmol/L的浓度溶于0.2mol/L醋酸钠/枸橼酸缓冲液(pH4.0),即可应用。②终止液:2 mol/L硫酸。③测定波长:450nm。
ABTS也是HRP的一种高灵敏底物。在H:O:存在下,ABTS的氨盐转变为易发生歧化的阳离子根(图4—4)。阳离子根为绿色,与OPD的黄色氧化产物相比更适于可见光测定(测定波长入=414nm)。上述显色也不稳定,10 mmol/L叠氮钠是较为理想的终止剂,可使显色稳定数十小时,且可减少阳离子根的歧化。另有人报道用1.25%NaF终止反应效果较好。
ABTS在目前国内的ELISA试剂盒中基本上没有应用,但在国外ELISA试剂盒偶见有应用。
在ELISA测定时,ABTS色原底物的具体配方为①显色底物溶液:先将ABTS以2 mmol/L和H202以2.5 mmo!/L的浓度溶于0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH 4.2),即可应用;②终止液:10 mmol/L叠氮钠;③测定波长;414nm或405nm。
除上述三种外,HRP的氧化还原底物尚有O-dianisidine(ODA),5—氨基水杨酸(5—AS)以及dicarboxindine等。
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小鼠促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒
酶联免疫吸附试验(又称酵素免疫分析法,Enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA)利用抗原抗体之间专一性键结之特性,对检体进行检测;由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计其键结机制后,配合酵素呈色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用呈色之深浅进行定量分析。
间接法常用于检测抗体,一般之操作步骤为:
将已知之抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余之抗原
加入待测检体,检体中若含有待测之一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结
洗去多余待测检体,加入带有酵素之二次抗体,与待测之一次抗体键结
洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,藉仪器(ELISA reader)测定塑胶盘中的吸光值(OD值),以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
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