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品牌: | 诚凛生物 |
规格: | 48T/96T |
货号: | CL-D3270 |
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【中文名称】:小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒
【英文名称】:MouseN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit
【产品货号】:CL-D3270
【产品规格】:96T/48T
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【保质期】:6个月,提供试剂盒最新批次
ELISA小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒检测中常用的酶底物
一、辣根过氧化物酶HRP
HRP最常用的色原底物有邻苯二胺(OPD)、2,2’—吖嗪—(3—乙酰苯基噻唑磺酸—6)[2,2’—azino-di(3—ethylben2thiazolinesulphonicacid-6),ABTS](杂环吖嗪)、四甲基联苯胺(TMB)和4—氨基安替比林:苯酚耦联底物对等。上述色原底物受HRP作用主要有两种形式的反应:①氧化还原底物的氧化作用,如OPD、ABTS等;②一个氨基芳香剂与另一个芳香基化合物的氧化耦联,如4—氨基安替比林:苯酚等。
1、氧化还原色原底物
OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一,其在HRP的作用下,由过氧化氢(H202)氧化而聚合成2,2’—二氨基偶氮苯(DAB)。在pH5.0左右时,DAB在波长450nm处有广范围的最大吸收,当pH值降为1.0时,最大吸收波长移动至492nm,同时摩尔消光系数变大,显色加深(图4—2)。因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。实际工作中,用强酸尤其是盐酸终止反应后,显色并不稳定,常随时间增长而颜色加深,这是由于反应后剩余的过氧化氢继续氧化OPD而产生非酶催化的DAB的结果。有人在强酸反应终止液中加入还原剂如亚硫酸钠,因还原剂可迅速完全地将剩余的过氧化氢还原而阻止了OPD的非酶氧化,结果显色稳定,数十小时内不变,而且无需避光。OPD的缺点是其对机体具有致突变作用。由于OPD的不稳定性,现在的商品试剂盒中,OPD均以片剂或粉剂供应,临用时再溶解于相应的缓冲液。
在ELISA测定时,小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒OPD色原底物的具体配方为①显色底物溶液:在0.1mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH5.0)中含20 mmol/L OPD和12 mmol/L H202,或10 mmol/L OPD和5.5mmol/L H202;
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酶联免疫吸附试验(又称酵素免疫分析法,Enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA)利用抗原抗体之间专一性键结之特性,对检体进行检测;由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计其键结机制后,配合酵素呈色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用呈色之深浅进行定量分析。
小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒间接法常用于检测抗体,一般之操作步骤为:
将已知之抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余之抗原加入待测检体,检体中若含有待测之一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结洗去多余待测检体,加入带有酵素之二次抗体,与待测之一次抗体键结洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,藉仪器(ELISA reader)测定塑胶盘中的吸光值(OD值),以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
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