一、杂交箱(分子杂交箱):主要用于生物大分子的杂交反应或其它长时间振摇的化学、生化及免疫学反应,是开展分子生物学技术不可缺少的仪器。
分子杂交的原理:应用核酸分子的变性和复性的性质,使来源不同的DNA(或RNA)片段,通过适温环境,按碱基互补关系形成杂交双链分子
应用:
① Southern 和 Northern 杂交技术;
② 预杂交和封闭洗脱;
③ 膜技术的杂交;
④ 微孔板杂交;
⑤ 热密封袋内的杂交或者洗脱;
⑥ 振荡或者静止的常规培养;
⑦ 袋内的细胞培养等。
二、杂交仪(原位杂交):根据实验者的设计,在玻片上完成原位杂交中变性和杂交两个过程,而且能严格控制反应温度和环境湿度,在保证实验的成功率和重复率的基础上极大提高实验效率。
原位杂交的原理:利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,讲有放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或者染色体上的位置显示出来。
应用:
① 细胞特异性mRNA转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;
② 感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位,如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测;
③ 癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测;
④ 基因在染色体上的定位;
⑤ 检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等
⑥ 分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等。
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