利巴韦林,属抗病毒药物,主要用于治疗流感病毒,但在动物中长期使用容易诱导流感病毒变异,已被我国农业部列入兽药禁止使用范畴。目前该种药物主要参照出入境标准《SN/T 4519-2016 出口动物源性食品中利巴韦林残留量的测定》进行检定。逗点生物依据此标准,采用自主生产的PBA净化小柱分别对鸡肉和鸡蛋中利巴韦林残留量进行加标回收验证,在添加水平为2.0 μg/kg时,回收率达80%以上,RSD小于10%,完全满足客户测试要求。
一、样品提取
称取5.0 g样品于50 mL离心管中,加入浓度为1 μg/mL同位素内标利巴韦林-13C5溶液10 μL,加入12 mL 20 g/L三氯乙酸水溶液和2.5 mL乙腈,涡旋混匀30 s,超声10 min,于8000 r/min离心5 min,上清液全部转移至50 mL离心管中,再向样品中加入10 mL 20 g/L三氯乙酸水溶液重复提取一次,合并两次提取液,用三氯乙酸水溶液定容至25 mL,再准确移取5 mL用氨水调节pH至8.5(±0.1)待净化(本实验是采用阴性样本做基质加标实验,故省略酶解步骤)。
二、SPE净化(Copure® PBA, 100 mg/3 mL)
(1)活化:向PBA柱中依次加入3 mL乙腈,3 mL 0.25 mol/L乙酸铵缓冲液(pH=8.5)进行活化。
(2)上样和洗脱:取上述待净化液过柱,控制流速不超过1 s/滴,然后用3 mL 0.25 mol/L乙酸铵缓冲液(pH=8.5)淋洗小柱,弃去全部流出液,抽干小柱,用2 mL 0.1mol/L甲酸水溶液洗脱,抽干小柱,收集全部洗脱液。
(3)上机:取上述洗脱液过0.22 μm PES水系滤膜,供上机分析。
三、标曲配制
采用内标法定量,分别精密量取适量的利巴韦林标准溶液和同位素内标利巴韦林-13C5工作液,用0.1 mol/L甲酸水溶液配制成适当浓度的标准工作溶液。
四、仪器条件
4.1 色谱条件
仪器:UPLC-MS/MS(Thermo Fisher TQS Endura)
色谱柱:CS2211003H(HILIC,2.1 mm×100 mm,3 μm)
流动相:A:5 mmol/L乙酸铵溶液(含0.1%甲酸) B:乙腈
洗脱方式:梯度洗脱,见表1
流速:0.4 mL/min 柱温:30 ℃ 进样量:2 μL
4.2 质谱条件
离子源:HESI 电喷雾电压:3500V
鞘气压力:40 arb 辅气压力:1 arb
离子传输管:300 ℃ 辅气温度:400 ℃
五、实验结果
六、订购信息
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