人纤维介素蛋白(fgl2)ELISA试剂盒

2015-06-05 16:53  下载量:1

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实验原理 用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗Fgl2抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗Fgl2抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Fgl2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。 标本的稀释原则: 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为800 ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释800 ng/ml,400 ng/ml,200 ng/ml,100 ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml,12.5 ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,临用前15分钟内配制。 如配制400 ng/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)800 ng/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则: 临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 注意事项 1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。 2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。 3. 一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。 5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。 6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。 7. 底物请避光保存。 8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

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