流行性出血热试剂盒步骤

2015-07-02 15:31  下载量:1

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使用目的: 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗流行性出血热病毒抗体IgM含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人抗流行性出血热病毒抗体IgM水平。用纯化的人抗流行性出血热病毒抗体IgM抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入抗流行性出血热病毒抗体IgM,再与HRP标记的抗流行性出血热病毒抗体IgM抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗流行性出血热病毒抗体IgM呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人抗流行性出血热病毒抗体IgM浓度。操作步骤 1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 80pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 40pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 20pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 10pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 5pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。 8. 洗涤:操作同5。 9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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