绵羊NK细胞酶联免疫分析试剂盒使用说明书

2016-01-20 09:32  下载量:1

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绵羊NK细胞酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒用于测定绵羊血清、血浆及相关液体样本中 NK细胞(NK)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊 NK 细胞(NK)水平。用纯化的绵羊 NK细胞(NK)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 NK细胞(NK),再与 HRP标记的 NK细胞(NK)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 NK细胞(NK)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中绵羊 NK细胞(NK)浓度。2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。操作程序总结:计算标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔第一孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效

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