大鼠丙二醛(MDA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

2016-04-13 09:15  下载量:1

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大鼠丙二醛(MDA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书 样本处理及要求: 1.血清:室温血液自然凝固 10-20分钟,离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2.血浆:应根据标本的要求选择 EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20分钟后,离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次 离心。 3.尿液:用无菌管收集,离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程 中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待 检测,其余冷冻备用。 6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融. 7.不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤: 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样 品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混 匀。 温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。 配液:将 30(48T的 20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30(48T的 20倍)倍稀释后备用。 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此 重复 5次,拍干。 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。 11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止 液后 15分钟以内进行。 注意事项: 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值 大于标准品孔第一孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计 算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理 9.本试剂不同批号组分不得混用。 10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 计算: 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释 倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值 代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释 倍数,即为样品的实际浓度。 (此图仅供参考) 试剂盒性能: 1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R值为 0.990以上。 2.批内与批见应分别小于 9%和 11% 检测范围: 0.2 nmol/L - 4 nmol/L 保存条件及有效期: 1.试剂盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6个月

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