细胞冻存的步骤

上海通蔚实业有限公司

1. 实验前准备：细胞室及工作台紫外线照射15min；培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水浴箱37℃预热备用；收集对数生长期细胞，在冻存前一天最好换液

2．用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液，PBS清洗2遍吸出冲洗液，加入适量胰蛋白酶消化。

3. 适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。吸管吸取培养液吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。

4. 用吸管将培养液加入冻存管中，离心(1000r/min，10分钟)。

5. 去上清液，加入与细胞悬液等量的冻存液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀

6. 冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16～18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1h，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

7．记录每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。

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