如何降低ELISA试剂盒实验背景的方法

人纤维连接蛋白ELISA检测试剂盒的说明书

简介：人纤维连接蛋白ELISA检测试剂盒试验原理： FN试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知FN浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将FN和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中FN的浓度呈比例关系。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 操作步骤 1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。 2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。 4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。 6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。 8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。 9．在450nm波长处测定各孔的OD值。 试剂盒性能 1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。 2. 特异性：不与其它细胞因子反应。 3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。 结 果 判 断 与 分 析 1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值 2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的FN标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的FN含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。 3、检测值范围：0-800ug/L 4、敏感度： 1.0 ug/L

人（human）内皮素-1（ET-1） 的说明书

简介：一、试 剂 组 成 精密度微孔板96孔 （Microtitration Strips） 1块 2～8℃干燥保存 酶标偶合液 （Conjugate ） 1瓶 12.0毫升 2～8℃冷藏保存 标准品 （Standard） 5瓶 各1.0毫升 2～8℃冷藏保存 呈色剂A （Substrate A） 1瓶 6.0毫升 2～8℃避光冷藏保存 呈色剂B （Substrate B） 1瓶 6.0毫升 2～8℃避光冷藏保存 终止液 （Stopping Solution） 1瓶 6.0毫升 室温保存 20倍浓缩洗涤液 （Rinsing Buffer x 20） 1瓶 60.0毫升 2～8℃冷藏保存 5倍浓缩样品稀释液 （Diluent x 5） 1瓶 15.0ml 2～8℃冷藏保存 英文说明书，中文说明书 各一份 室温保存 二、注意事项 1. 此试剂为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。 2．使用前应将盒内各试剂取出。室温放置至少30分钟， 3．浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟。 4．浓缩样品稀释液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟 5．若24小时内进行实验，标本可存放于2～8℃。不需及时实验，标本-20℃保存，避免反复冻融。 6．在反复清洗微孔板，并扣干微孔中的残余液体，否则将降低精确度，造成吸光度偏离的假像。 7．加样完毕后，应注意轻微摇动微孔反应条，以便使孔中的液体充分混匀。 8．试剂盒保存于2～8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。 三、实验前准备 1．使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。 2．准备各种实验仪器及材料，如微量移液器，吸头，医用蒸馏水等 3．浓缩洗液与医用蒸馏水1︰19倍稀释后成为应用洗涤液 4．浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1︰4倍稀释成应用样品稀释液 5．用应用样品稀释液来稀释样品，按照1：100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中，充分混匀待用。） 四、操 作 步 骤 1．取出酶标板，设空白孔，依照次序对应分别加入100μl的标准品于空白微孔中（空白孔视为0号标准品，用医用蒸馏水替代） 2、分别标记样品编号，加入100μl的稀释样品于空白微孔中（不同的样本采用不同的吸头）。 3、将酶标板置于37℃温育30分钟； 4、将酶标板板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体; 5、每个孔中加满应用洗涤液后，轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干。 6、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干。 7、在标准品孔和样品孔中加入100μl的酶标偶合溶液。 8、将96孔板置于37℃温育30分钟。 9、将酶标板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体。 10、每个孔中再次加满洗涤应用液后，室温轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干。 11、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干。 12、在每个孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。轻轻振荡混匀。（A液、B液采用不同的吸头加样） 13、将酶标板置于37℃避光温育反应15分钟。 14、每个微孔中加入50μl的终止液，轻轻振荡混匀。 15、在酶标仪上，450nm处测定OD; 显色后，15分钟内进行测定。 16、根据制备的标准曲线，计算样本含量 五、结 果 判 断 1. 仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值； 2、检测值范围：0－40pg/ml 3、敏感度：0.1pg/ml

人白介素10ELISA使用说明书

简介：实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素10（IL-10）水平。用纯化的人白介素10（IL-10）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素10（IL-10），再与HRP标记的白介素10（IL-10）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素10（IL-10）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白介素10（IL-10）浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（800ng/L） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 400 ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 200 ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 100 ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 50 ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 25 ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6个月

鸡α干扰素（IFN-α）ELISA试剂盒资料下载

简介：鸡α干扰素（IFN-α）ELISA试剂盒注意事项： 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

猪免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒样本说明

简介：使用目的：猪免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中内皮素 （ET）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠内皮素 （ET）水平。用纯化的大鼠内皮素 （ET）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内皮素 （ET），再与HRP标记的内皮素 （ET）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的内皮素 （ET）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠内皮素 （ET）浓度。 猪免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 120μg/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 60μg/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 30μg/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 15μg/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 7.5μg/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 猪免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。