ELISA结果造成假阳性的原因何在?
ELISA 实验样本要求: 血清标本宜在新鲜时检测,严重溶血标本禁用。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合。超过一周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄 清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存;最好使用一次性玻璃试管或真空管采血管;并使用非抗凝 标本,肝素抗凝血浆会增加OD值,可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关;EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA系统 中辣根过氧化物酶活性;血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清,或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
关于ELISA结果造成假阳性的原因我司技术做出如下原因分析:
1.样本严重溶血 ,以HRP为标记的ELISA测定中,残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性,催化底物显色造成假阳性。
2. 混有红细胞的血清沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净;如有细菌污染 ,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应;
3. 标本凝固不全 ,有时为了争取时间快速检测,常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清,使血清中仍残留部分纤维蛋白原,在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果;
4. 采血试管洗涤不彻底 、反复使用易交叉污染; 塑料试管能吸附抗原物质 ,样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。
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