Etaluma固态光学系统提供
无像素偏移的合成图像
传统的多色荧光显微镜是通过为每个通道引入一套滤色镜组(包含激发滤色镜,二向色镜和发射滤色镜),然后通过切换滤色镜组生成单个颜色的图像,再用软件进行叠加以实现颜色合成。通常这些滤色镜组会安装在一个转轮上,当这些滤色镜组转轮在物理上重新定位时,每个光路中的微小变化会导致每个通道相对于其他通道略微移位。最终导致的结果是多个颜色的图像叠加时,本应该重叠的区域相邻却没有重叠(如图)或者本应该分离的区域重叠。这被称为像素偏移。
为缓解这个问题,传统荧光显微镜在数码成像时,可以在软件中预先输入一个“预期像素偏移值”对像素偏移进行补偿。对于希望通过免疫荧光进行最精确定位的显微镜学家来说,仅仅靠一个补偿值是远远不够理想的。此外,确定所需的补偿值非常耗时而且需要在相同的实验条件下进行校准。
Etaluma LS系列显微镜不存在像素偏移的问题,因为我们的光学模块是固定的,即没有需要切换的部件。LED光源和滤色片都是固定不动的。相对的,当使用滤光镜组转轮时,不同的滤色镜组移入移出光路,引起像素偏移。而我们选用美国Semrock公司一组多波段Pinkel二向色镜和发射滤色镜组,开发出固态光学系统,有效解决的像素偏移的问题。
为了说明这一点,右边的示意图显示了Etaluma在LS620和自动化LS720中使用的固态3色光学模块。405nm的LED首先打开,紫光经过它的激发滤色镜,被二向色镜反射到样本上,发射光经过多通二向色镜和发射滤色镜,得到一束窄带蓝光,到达相机传感器。然后,蓝色488nm的LED打开,使相机采集到窄带绿色荧光。琥珀色590nm的LED打开,相机采集到红色荧光。由于整个采集过程中光学元件没有位置上的移动,因此合成图像不会产生像素偏移。
Etaluma LS系列显微镜的光路非常高效;当光线从LED到样品再到照相机这一过程中,透镜和滤光片相对较少,结合高灵敏度的CMOS传感器,意味着与传统显微镜相比,LS显微镜具有极高的灵敏度。
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