用无菌均质器获取大量单个细胞的方法

2021-06-30 17:50  下载量:0

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将手术中切取的肿瘤组织(如胃癌、大肠癌、乳腺癌)放在无菌平皿中,用含有庆大霉素100U/ml的生理盐水洗涤,去除组织上粘附的细菌,洗3次后按2g重量加入10ml生理盐水,用剪刀剪成小块,尽量小些,2-5mm见方均可,装入均质袋中。 按无菌均质器使用说明书的方法进行操作,技术参数为10次/秒5-10分钟,每分钟停1分钟,计算累记分钟,不同组织使用时间稍有不同。再将处理后的组织混合物吸入试管中,静置3-5分钟,取澄清的部分细胞悬浊液,内含大量单个分散细胞,1000转/分离心5分钟,加入含20%小牛血清培养液,可以直接培养,细胞数可以调节在2×105ml左右,总细胞数随组织块大小可以有变化,但培养用细胞多。 观察到单个圆形细胞为所需要的被分散的单细胞,包括腺体细胞及上皮类细胞,不规则梭形细胞为打散的肌纤维细胞,也是分散的单细胞。都有完整圆润的细胞形态,活性很好

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