近年来,色谱和质谱分析方法已成为科研人员检测糖类物质的主要手段,如离子色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。
糖类物质检测
离子色谱法:不仅能检测阴阳离子,还能将一些非离子型化合物转变成离子化合物进行分析。由于糖类遇碱后阴离子化,在恒定电位的安培检测器中有响应值,因此一般采用离子色谱与安培检测器联用检测糖类。采用高效离子色谱-脉冲安培检测法,以NaOH-乙酸钠为流动相,同时检测出婴幼儿配方乳粉中棉籽糖、蔗果四糖、水苏糖等多种低聚糖含量。此方法样品前处理简单,不需要提前衍生化;灵敏度高,可检测低至pmol级别的糖类物质含量,分析时间短,重现性好。
气相色谱法:GC也可以用于糖类物质检测,但糖类挥发性太低,样品需要提前衍生化处理后才能用气相色谱检测。另,样品提取液要经过多个不同极性的色谱柱才能分离到比较纯的糖组分,操作繁杂、耗时长、误差较大,因此一般不建议使用气相色谱法检测糖类。
毛细管电泳法:CE检测方式有电化学检测、紫外-可见光检测、荧光检测等。由于糖类本身不带电、无紫外吸收和荧光基团,因此不能直接用毛细管电泳分离,须提前对糖类进行衍生化使其携带紫外吸收基团或荧光基团,才能用毛细管电泳法进行检测。此方法前处理比较复杂,整个分析时间较长。
高效液相色谱法:HPLC是糖类物质检测最常用的方法,样品无需衍生化,前处理后,利用不同的色谱柱和流动相,采用示差折光检测法(RID)或蒸发光散射检测法(ELSD)进行检测。高效液相色谱法操作简便、分析时间短、结果准确。
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