DH10B 感受态细胞

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产品描述：

产品名称：DH10B 感受态细胞

描述: 本公司生产的DH10B感受态细胞是采用大肠杆菌DH10B菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108 cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。
基因型：
F-mcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZ?M15?lacX74recA1endA1araD139?(ara,leu)7697galE15galKλ-rpsLnupG 
产品特点：
1、可高效转化大小为150Kb质粒，用于产生cDNA或基因组文库。
2、用于蓝、白斑筛选。

使用方法: 提示： 1、感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。 2、进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。 3、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。 操作： 1、取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。 （一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用 DNA 体积 不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。)以下实验以 100μl 感受态细胞为例。 2、向感受态细胞悬液中加入目的 DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置 30 分钟。 3、将离心管置于 42℃水浴中放置 60 秒钟，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2 分钟，该过程不要 摇动离心管。（此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置 5-8 分钟左右；如果室温较低，可延长时间至 8-15 分钟左右。条件允许建议使用 42℃热激方法。） 4、向每个离心管中加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃ ，150rpm， 摇床振荡培养 60 分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 5、无菌条件下，取适量菌液加到含相应抗生素的 LB 固体培养基平板上，用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将 细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。（涂布用量可根据具 体实验来调整。转化质粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100μl，55mm 平皿涂布 50μl；连接产物的转 化菌液建议离心后倒掉大部分上清，余 200μl，取 100μl 用于涂布。） 6、保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。 相关试剂及培养基的制备方法： 1、LB 液体培养基：称取 10gTryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 烧杯中。加入约 800ml 的去 离子水，完全溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液调节 pH 值至 7.0。加去离子水定容至 1L。分装 后，121℃高压灭菌 20 分钟。 2、SOB 和 SOC 培养基：称取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 烧杯中加入约 800ml 的 去离子水，完全溶解后再补加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（约 0.2ml）调 pH 至 7.0。加 入去离子水将培养基定容至 1L。121℃灭菌 20 分钟。使用时加入 5ml 灭菌的 2M MgCl2溶液（此种 培养基称为 SOB）。再补加经 0.22μm 过滤除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此种培养基为 SOC）。 3、转化复苏细菌用的液体 LB 培养基或 SOC 培养基：可以一次高压 50ml 液体培养基，无菌状态按 1ml 每管分装于高压灭菌的 1.5ml 离心管中，装于自封袋中，冻存于-20℃中，每次用一支。可以极大地避 免培养基污染和减少劳动量。 4、LB 固体选择培养基：100ml LB 液体培养基中加入 1.5g 琼脂粉，摇匀后，121℃高压灭菌 20 分钟。 冷却至 50℃左右时加入相应浓度的抗生素（如 AMP 浓度通常为 100μg/ml），混匀后倒在细菌用的无 菌培养皿中，等琼脂凝固后即可使用。 5、IPTG：称量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 灭菌水，浓度为 200mmol/L。用无菌 0.22μm过滤膜过滤除菌。小份分装后，-20℃保存。 6、 X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分装（1ml/份）后，-20℃避光保存。

储存/保存方法: -70℃保存，避免反复冻融

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