T7pLysY感受态细胞

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产品描述：

产品名称：T7pLysY感受态细胞

描述: T7pLysY菌株为大肠杆菌BL21增强型菌株，为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型，用于毒性或非毒性蛋白的表达。该菌株区别于BL21(DE3)pLysS和BL21(DE3)pLysE菌株的优势在于T7 RNA聚合酶基因整合在细菌染色体上的lac操纵子区域，基因组中无λ前噬菌体序列，LysY表达的T7溶菌酶保留了对T7 RNA聚合酶的抑制作用但缺失了水解细胞壁的酰胺酶活性，有利于降低基因的背景表达和避免诱导过程中细菌的裂解，菌株具有抗T1噬菌体感染等特点。T7pLysY表达感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率大于10⁸ cfu/μg。
基因型：
fhuA2lacZ::T7gene1[lon]ompTgalsulA11R(mcr-73::miniTn10--TetS)2[dcm]R(zgb-210::Tn10--TetS)endA1D(mcrC-mrr)114::IS10 lysY (CamR)
菌株抗性：
对氨苄青霉素，壮观霉素，卡那霉素，链霉素和四环素敏感，对氯霉素有抗性。

使用方法: 质粒转化步骤： 1、将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入质粒DNA 到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀； 2、冰水浴中放置15-30 分钟，不要晃动； 3、42℃热击 60 秒钟，不要晃动； 4、冰水浴中放置2 分钟，不要晃动； 5、加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基； 6、置于 37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟； 7、取 50-100μl 菌液涂布在含 34μg/ml 氯霉素及所选质粒筛选抗生素的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置 平板，37℃培养 12-16 小时。 平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块，取 10μl 重悬的菌液分多点滴在抗性 LB 平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。37℃培养过夜。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。 蛋白表达步骤： 1、挑取单菌落，接种到5ml 含34μg/ml 氯霉素及所选质粒筛选抗生素的LB 培养基中。 2、37℃，200rpm 震荡培养细菌至对数生长期（OD600=0.4-0.8）。 3、加入 IPTG 到终浓度为 0.4mM，37℃诱导 2-4 小时或 16℃诱导过夜。 4、诱导完成后，离心收集菌体，用合适的方法（如考马斯亮蓝染胶法，Western-Blot法或酶活性分析法） 分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分，明确表达产物的表达状况（可溶性或不溶性表达）。 5、大量表达时，可用 10ml 过夜培养物转接到 1L 培养基中，当培养到 OD600=0.4-0.8 时，加入终浓度为 0.4mM的 IPTG，37℃诱导 2-4 小时或 16℃诱导过夜（不同蛋白表达的最佳条件有所不同，需在实验中优化）。

储存/保存方法: -70℃保存，避免反复冻融

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