Rosetta-gami 2(DE3) 感受态细胞|10×100ul|abs60080-爱必信(上海)生物科技有限公司

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产品描述：

产品名称：Bax Antibody

描述: OverExpress C41(DE3)菌株适用于毒性蛋白的表达，来源于BL21(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)是通过毒性蛋白在BL21(DE3)内过表达筛选实验得到的基因突变菌株，该菌株的基因突变降低了T7 RNA聚合酶的酶活性，下调毒性蛋白的表达量使细胞存活。OverExpress C41(DE3)菌株也可以表达常规蛋白，相同条件下，蛋白表达量略低于BL21(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)菌株属于B菌株，lon和ompT蛋白酶缺陷型。OverExpress C41(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1×107 cfu/μg DNA。
基因型：
F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3)
菌株抗性：
对氨苄青霉素，卡那霉素，氯霉素和四环素敏感。

使用方法: 质粒转化步骤（以氨苄青霉素抗性的 pET 质粒为例）： 1、将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5 μl 含有 1-100 ng 的质粒 DNA 到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。 2、冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。 3、42℃热击 60 秒钟，不要晃动。 4、冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。 5、加入 500 μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。 6、置于 37℃摇床中，150-200 rpm，复苏培养 60 分钟。 7、取 50-100 μl 菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 37℃培养 12-24 小时。平板划线分离法：复苏培养结束后，12000 rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100 μl 左右的液体，用 200 μl 吸头轻轻吹打散菌块，取 10 μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。蛋白表达步骤： 1、挑取单菌落，接种到含 5 ml 带抗生素的 LB 培养基中。 2、37℃，200 rpm 震荡培养细菌至对数生长期（OD600=0.4-0.8）。 3、加入 IPTG 到终浓度为 0.4 mM，37℃诱导 4 小时或 16℃诱导过夜。（可以设定不同浓度的 IPTG 来诱导表达。） 4、诱导完成后，离心收集菌体，用合适的方法（如考马斯亮蓝染胶法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分，明确表达产物的表达状况（可溶性或不溶性表达）。重组蛋白大量表达时，可用 10 ml 过夜培养物转接到 1 L 培养基中，当培养到 OD600=0.4-0.8 时，加入终浓度为 0.4 mM 的 IPTG， 37℃诱导 4 小时或 16℃诱导过夜（不同蛋白表达的最佳条件有所不同，需在实验中优化）。

储存/保存方法: -70℃保存，避免反复冻融

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产品货号	产品名称	规格	价格	大包装及货期
abs60069	OverExpress C41(DE3)感受态细胞	10×100ul	240.00	立即咨询
abs60069	OverExpress C41(DE3)感受态细胞	20×100ul	420.00	立即咨询

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供货周期：	一周
品牌：	爱必信
规格：	10×100ul
货号：	abs60080
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